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原位雜交實(shí)驗1探針的設計與合成1)根據實(shí)驗室已有的p8基因cDNA全長(cháng)序列，用premierprimer5.0設計引物p81和p82，以鹵蟲(chóng)cDNA為模板，PCR擴增得到346bp的產(chǎn)物，用Takara膠回收試劑盒回收純化。引物編號引物序列長(cháng)度p81TGCGGACGAAACAGGAAG18bpp82GCTCAAACAGTGATGCCAGT20bp2)目的片段克隆a.在無(wú)菌離心管中加入連接載體的各種成分，載體與片段的摩爾比控制在1:3-1:8，根據凝膠電泳檢測后的濃度及載體與片...
熒光原位雜交實(shí)驗（FISH）熒光原位雜交（FluorescenceinsituhybridizationFISH）是一門(mén)新興的分子細胞遺傳學(xué)技術(shù)，是20世紀80年代末期在原有的放射性原位雜交技術(shù)的基礎上發(fā)展起來(lái)的一種非放射性原位雜交技術(shù)。目前這項技術(shù)已經(jīng)廣泛應用于動(dòng)植物基因組結構研究、染色體精細結構變異分析、病毒感染分析、人類(lèi)產(chǎn)前診斷、腫瘤遺傳學(xué)和基因組進(jìn)化研究待許多領(lǐng)域。1實(shí)驗方法原理：熒光原位雜交（FluorescenceinsituhybridizationFISH）是...
石蠟切片制作(蘇木精-伊紅對染法)實(shí)驗原理：石蠟切片是基本的切片技術(shù)，冰凍切片和超薄切片等都是在石蠟切片基礎上發(fā)展起來(lái)的。蘇木素與伊紅對比染色法（簡(jiǎn)稱(chēng)H.E.對染法）是組織切片常用的染色方法。這種方法適用范圍廣泛，對組織細胞的各種成分都可著(zhù)色，便于全面觀(guān)察組織構造，而且適用于各種固定液固定的材料，染色后不易褪色可長(cháng)期保存。經(jīng)過(guò)HE染色，細胞核被蘇木素染成藍紫色，細胞質(zhì)被伊紅染色呈粉紅色。一、器材及試劑：1.器材：切片刀，切片機，恒溫箱，蠟杯，酒精燈，解剖刀，解剖剪，解剖盤(pán)，培...
siRNA表達載體的構建siRNA表達載體構建可以：（1）作為后基因組時(shí)代基因功能分析的有力工具；（2）應用于基因組學(xué)、細胞信號傳導通路分析；（3）用于藥物靶點(diǎn)篩選、疾病治療。實(shí)驗方法原理:多數的siRNA表達載體依賴(lài)三種RNA聚合酶III啟動(dòng)子(polIII)中的一種，操縱一段小的發(fā)夾RNA(shorthairpinRNA,shRNA)在哺乳動(dòng)物細胞中的表達。這三類(lèi)啟動(dòng)子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6啟動(dòng)子和人H1啟動(dòng)子。之所以采用RNApolIII啟動(dòng)子是由于它可以在哺乳...
RNA的瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗原理和步驟一、實(shí)驗目的掌握植物總RNA非變性膠電泳的原理和方法。二、實(shí)驗原理RNA電泳可以在變性及非變性?xún)煞N條件下進(jìn)行。非變性電泳使用1.0%--1.4%的凝膠，不同的RNA條帶也能分開(kāi)，但無(wú)法判斷其分子量。只有在*變性的條件下，RNA的泳動(dòng)率才與分子量的對數呈線(xiàn)性關(guān)系。因此要測定RNA分子量時(shí)，一定要用變性凝膠。在需快速檢測所提總RNA樣品完整性時(shí)，配制普通的1%瓊脂糖凝膠即可。三、實(shí)驗材料、器具及藥品蘑菇的總RNA溶液。電泳儀，電泳槽，電子天平，...
RNA干擾實(shí)驗（如需詳細資料，請聯(lián)系超博科技小凌）一、磷酸鈣轉染法【實(shí)驗原理】磷酸鈣沉淀法是基于磷酸鈣-DNA復合物的一種將DNA導入真核細胞的轉染方法。磷酸鈣有利于促進(jìn)外源DNA與靶細胞表面的結合。磷酸鈣-DNA復合物粘附到細胞膜并通過(guò)胞飲作用進(jìn)入靶細胞，被轉染的DNA可以在細胞內進(jìn)行瞬時(shí)表達，也可整合到靶細胞的染色體上從而產(chǎn)生不同基因型和表型的穩定克隆。該方法可廣泛用于轉染許多不同類(lèi)型的細胞?！緝x器、材料和試劑】（一）儀器、用具CO2培養箱、10cm細胞培養平板、巴斯德吸...
NorthernBlot原理及實(shí)驗方法原理：在變性條件下將待檢的RNA樣品進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，繼而將在凝膠中的位置轉移到硝酸纖維素薄膜或尼龍膜上，固定后再與同位素或其它標記物標記的RNA探針進(jìn)行反應。用途：檢測樣品中是否含有基因的轉錄產(chǎn)物（mRNA）及其含量。實(shí)驗方法：[儀器、試劑、材料]（一）儀器恒溫水浴箱，電泳儀，凝膠成像系統，真空轉移儀，真空泵，UV交聯(lián)儀，雜交爐，恒溫搖床，脫色搖床，漩渦振蕩器，分光光度計，微量移液器，電爐（或微波爐），離心管，燒杯，量筒，三角瓶等。（...
mRNA的分離純化（內有數據圖，如有需要請聯(lián)系超博小凌）mRNA的分離純化【實(shí)驗原理】真核生物的mRNA分子是單順?lè )醋?，是編碼蛋白質(zhì)的基因轉錄產(chǎn)物。真核生物的所有蛋白質(zhì)歸根到底都是mRNA的翻譯產(chǎn)物，因此，高質(zhì)量mRNA的分離純化是克隆基因、提高cDNA文庫構建效率的決定性因素。哺乳動(dòng)物平均每個(gè)細胞含有約1x10-5gRNA，理論上認為每克細胞可分離出5～10mgRNA。其中rRNA為75％～85％，tRNA占10％～16％，而mRNA僅占1%～5％，并且mRNA分子種類(lèi)繁多...
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