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原代細胞的培養與建系凡是來(lái)源于胚胎、組織器官及外周血，經(jīng)特殊分離方法制備而來(lái)的原初培養的細胞稱(chēng)之為原代細胞。細胞的純化或細胞克隆技術(shù)是細胞培養工作的基礎。原代細胞的取材人和動(dòng)物細胞的取材是原代細胞培養成功的首要條件，直接影響細胞的體外培養。一、取材的基本要求.1．取材要注意新鮮和保鮮.2．應嚴格無(wú)菌.3．防止機械損傷.4．去除無(wú)用組織和避免干燥.5．應注意組織類(lèi)型、分化程度、年齡等.6．作好記錄二、各類(lèi)組織的取材技術(shù)皮膚和粘膜的取材內臟和實(shí)體瘤的取材血液細胞的取材骨髓、羊水、...
原代細胞培養和傳代培養的方法原代培養原理將動(dòng)物機體的各種組織從機體中取出，經(jīng)各種酶（常用胰蛋白酶）、螯合劑（常用EDTA）或機械方法處理，分散成單細胞，置合適的培養基中培養，使細胞得以生存、生長(cháng)和繁殖，這一過(guò)程稱(chēng)原代培養。儀器、材料及試劑儀器：培養箱（調整至37℃），培養瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、紗布、手術(shù)器械、血球計數板、離心機、水浴箱（37℃）材料：動(dòng)物組織塊試劑：1640培養基（含20%小牛血清），0.25%胰酶，Hank′s液，碘酒初代消化培養法1...
實(shí)時(shí)熒光定量PCR具體實(shí)驗步驟1樣品RNA的抽提①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。②兩相分離每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的氯f(wàn)ang，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚氯f(wàn)ang相，中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀將水相上層轉移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中...
近年來(lái)，ELISA試劑盒以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)得到了廣泛的應用。ELISA可用于測定抗原，也可以用于測定抗體。根據試劑的來(lái)源和標本的情況以及檢測的具體條件，可以分為雙抗夾心法、間接法、競爭法等常見(jiàn)幾種類(lèi)型。那么，這幾種常見(jiàn)類(lèi)型分別適用于哪些實(shí)驗？這些類(lèi)型的優(yōu)缺點(diǎn)又是什么呢？今天小編就和大家一起來(lái)了解下雙抗夾心法、間接法、競爭法。雙抗體夾心法測抗原：雙抗體夾心法是檢測抗原zui常用的方法，適用于測定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子抗原，但不適用于測定半抗原及小分子單價(jià)抗原，因其不...
需要準備好細胞所要用到的培養基和相關(guān)試劑,雖然所有的貼壁,半貼壁或者懸浮細胞處理方式差不多,但是不同的實(shí)驗室培養條件和處理力度還有試劑的批間差這些問(wèn)題存在,也會(huì )導致對細胞處理不當,或者環(huán)境的不適應而造成細胞的死亡。1）收到細胞,時(shí)間要鏡檢：觀(guān)察細胞形態(tài)是否正常,對于貼壁細胞則要注意看貼壁情況是否很好,觀(guān)察細胞密度,有疑議及時(shí)咨詢(xún)提供細胞的技術(shù)人員。由于運輸的時(shí)間或者溫度的變化,很多貼壁細胞在盛滿(mǎn)培養基的瓶子里生長(cháng)的狀態(tài)和平時(shí)會(huì )有點(diǎn)不一樣,主要是貼壁牢固問(wèn)題。比如293T,平時(shí)...
小鼠骨髓與骨內膜間充質(zhì)干細胞分析FlowCytometryAnalysisofMouseBoneMarrowａndEndosteumMesenchymalStromalCells摘要：骨髓間充質(zhì)干細胞(MesenchymalStromalCells，MSCs)是骨髓中具有自我更新能力，和成骨、成軟骨和成脂肪多向分化潛能的成體干細胞。MSC具有在體外形成纖維細胞集落(CFU-F)和在體內、外分化為骨、軟骨和脂肪細胞的能力。本文以小鼠骨髓組織為例，使用5種一抗和1種二抗，介紹在骨...
CulturingofC57BL/6MouseEmbryonicStem(ES)CellLineC57BL/6老鼠胚胎干細胞系的體外培養AbstractUsingATCCESC57BL/6asanexample,itisshownherehowtoculturemouseembryonicstem(ES)cellline.Theclonalembryonicstemcellline#693ESC57BL/6wasderivedfromastrainC57BL/6J(B6)mo...
LentivirusProductionAbstractLentivirusisacommontoolusedtointroduceageneintomammalianorotheranimalcells.Thisprotocolistoproducelentivirusstocksfromhairpin-pLKO.1plasmid.MaterialsａndReagentsHairpin-pLKO.1vector(OpenBiosystems).Packagingvector...
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