RNA的瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗原理和步驟 

一、實(shí)驗目的 

掌握植物總RNA非變性膠電泳的原理和方法。 

二、實(shí)驗原理 

RNA電泳可以在變性及非變性?xún)煞N條件下進(jìn)行。非變性電泳使用1.0%--1.4%的凝膠，不

同的RNA條帶也能分開(kāi)，但無(wú)法判斷其分子量。只有在*變性的條件下，RNA的泳動(dòng)

率才與分子量的對數呈線(xiàn)性關(guān)系。因此要測定RNA分子量時(shí)，一定要用變性凝膠。在需快

速檢測所提總RNA樣品完整性時(shí)，配制普通的1%瓊脂糖凝膠即可。 

三、實(shí)驗材料、器具及藥品 

蘑菇的總RNA溶液。 電泳儀，電泳槽，電子天平，移液器，槍頭，微波爐，紫外透射檢

測儀等。 瓊脂糖，1XTAE電泳緩沖液，0.5μg/ml溴化乙錠（EB）10X載樣緩沖液。 

四、實(shí)驗步驟 

（1）用1×TAE電泳緩沖液制作瓊脂糖凝膠，加1×TAE電泳緩沖液至液面覆蓋凝膠。 

（2）在超凈工作臺上，用移液器吸取總RNA樣品4μl于封口膜上。在實(shí)驗臺上再加入5μl 

1×TAE電泳緩沖液及1μl 的10X載樣緩沖液，混勻后，小心加入點(diǎn)樣孔。 

（3）打開(kāi)電源開(kāi)關(guān)，調節電壓至100V，使RNA由負極向正極電泳，約30min后將凝膠

放入EB染液中染色5min,用清水稍微漂洗。在紫外透射檢測儀上觀(guān)察RNA電泳結果。 

RNA的變性瓊脂糖凝膠檢測 

試劑： 

（1）MOPS緩沖液（10*）:0.4mol/L 嗎啉代丙烷磺酸（MOPS） (Ph7.0)，0.1mol/L NaAc, 

10mol/L EDTA。 

（2）上樣染料：50%甘油，1mmol/L EDTA ,0.4%溴酚藍，0.4%二甲苯藍。 

（3）甲醛。 

（4）去離子甲酰胺。v電泳槽清洗：去污劑洗干凈（一般浸泡過(guò)夜）——水沖洗——乙醇

干燥——3%H2O2灌滿(mǎn)——室溫放置10分鐘——0.1%DEPC水沖洗。 

操作： 

（1） 將制膠用具用70%乙醇沖冼一遍，晾干備用。 

（2） 配制瓊脂糖凝膠。 

①稱(chēng)取0.5g瓊脂糖，置干凈的100ml 錐形瓶中，加入40ml蒸餾水，微波爐內加熱使瓊

脂糖*溶化均勻。 

②待膠涼至60--70 ℃，依次向其中加入9ml 甲醛、5ml 10X MOPS緩沖液和0.5ul 溴化

乙錠，混合均勻。 

③灌制瓊脂糖凝膠。 

（3） 樣品準備： 

① 取 DEPC處理過(guò)的500ul小離心管，依次加入如下試劑： 10x MOPS緩沖液2ul，甲

醛3.5ul,甲酰胺（去離子）10ul，RNA 樣品 4.5ul,混勻。 

② 將離心管置于60℃水浴中保10分鐘，再置冰上2分鐘。 

③ 向管中加入3ul 上樣染料，混勻。 

（4）上樣。 

（5）電泳：電泳槽內加入1XMOPS緩沖液，于7.5V/ml 的電壓下電泳。 

（6）電泳結束后，在紫外燈下檢查結果。