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SSR(SimpleSequenceRepeats)又稱(chēng)微衛星DNA，是一類(lèi)由幾個(gè)(多為1~6個(gè))堿基組成的基序(motif)串聯(lián)重復而成的DNA序列，其長(cháng)度一般較短，它們廣泛分布于整個(gè)基因組的不同位置上，每個(gè)座位上重復單位的數目及重復單位的序列都可能不*相同，因而造成了每個(gè)座位上的多態(tài)性。SSR標記數量豐富，覆蓋整個(gè)基因組，而且分布均勻，多態(tài)性高，呈共顯性遺傳，重復性好，操作簡(jiǎn)便，是一種理想的分子標記技術(shù)，被廣泛應用于構建基因連鎖圖分子輔助育種品種鑒定遺傳資源的保存等方面。...
SouthernBlot原理及實(shí)驗方法原理：將待檢測的DNA分子用/不用限制性?xún)惹忻赶?，通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行分離，繼而將其變性并按其在凝膠中的位置轉移到硝酸纖維素薄膜或尼龍膜上，固定后再與同位素或其它標記物標記的DNA或RNA探針進(jìn)行反應。如果待檢物中含有與探針互補的序列，則二者通過(guò)堿基互補的原理進(jìn)行結合，游離探針洗滌后用自顯影或其它合適的技術(shù)進(jìn)行檢測，從而顯示出待檢的片段及其相對大小。用途：檢測樣品中的DNA及其含量，了解基因的狀態(tài),如是否有點(diǎn)突變、擴增重排等。試劑和...
DNA的瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗目的瓊脂糖凝膠電泳是常用的檢測核酸的方法，具有操作方便、經(jīng)濟快速等優(yōu)點(diǎn)。本實(shí)驗學(xué)習DNA瓊脂糖凝膠電泳的使用技術(shù)，掌握有關(guān)的技術(shù)和識讀電泳圖譜的方法。實(shí)驗原理瓊脂糖凝膠電泳是常用的用于分離、鑒定DNA、RNA分子混合物的方法，這種電泳方法以瓊脂凝膠作為支持物，利用DNA分子在泳動(dòng)時(shí)的電荷效應和分子篩效應，達到分離混合物的目的。DNA分子在高于其等電點(diǎn)的溶液中帶負電，在電場(chǎng)中向陽(yáng)極移動(dòng)。在一定的電場(chǎng)強度下，DNA分子的遷移速度取決于分子篩效應，即分子本...
cDNA文庫構建(字體說(shuō)明：FANG-仿，DI-第,suan-酸)cDNA文庫[原理]：cDNA文庫不同于基因組文庫，被克隆DNA是從mRNA反轉錄來(lái)源的DNA。CDNA組成特點(diǎn)是其中不含有內含子和其他調控序列。從而做cDNA克隆時(shí)應是先從獲得mRNA開(kāi)始，在此基礎上，通過(guò)反轉錄酶作用產(chǎn)生一條與mRNA相互補的DNA鏈，然后除掉mRNA，以DI一條DNA鏈為模板復制出DI二條DNA鏈（雙鏈）；再進(jìn)一步把此雙鏈插入原核或真核載體。cDNA文庫的構建分為六個(gè)階段：階段1：反轉錄酶...
降落PCR(如有不明，可以咨詢(xún)超博小凌)降落PCR（touchdownPCR），一種PCR技術(shù)，主要用于PCR的條件的優(yōu)化。在許多情況下引物的設計使得PCR難以進(jìn)行，例如特異性不夠易錯配等。退火溫度過(guò)高會(huì )使PCR效率過(guò)低，但退火溫度過(guò)低則會(huì )使非特異擴增過(guò)多。實(shí)驗材料:基因樣品儀器、耗材:PCR儀實(shí)驗步驟：1.反應體積為50μl。2.人CD137胞膜外區基因的PCR擴增體系：CD137-pCDNA3質(zhì)粒4μl，P1，P2各0.5μmol/L，MgCl22mmol/L，dNTP0...
普通PCR、原位PCR、反向PCR和反轉錄PCR的基本原理和操作步驟普通PCR1概述聚合酶鏈式反應(PolymeraseChainReaction)，簡(jiǎn)稱(chēng)PCR，是一種分子生物學(xué)技術(shù)，用于放大特定的DNA片段?？煽醋魃矬w外的特殊DNA復制。DNA聚合酶（DNApolymeraseI）早于1955年發(fā)現，而較具有實(shí)驗價(jià)值及實(shí)用性的KlenowfragmentofE.Coli則是于70年代的初期由Dr.H.Klenow所發(fā)現，但由于此酶不耐高溫，高溫能使之變性,因此不符合使用高...
目的基因PCR擴增產(chǎn)物的克隆[實(shí)驗原理]1.PCR產(chǎn)物回收在高離子鹽存在的情況下，DNA片斷選擇性的吸附于離心柱內的硅基質(zhì)膜上，再通過(guò)一系列快速的漂洗、離心的步驟去蛋白液和漂選液，將引物、核苷酸、蛋白酶等雜質(zhì)去除，后用低鹽，高pH值的洗脫緩沖液將純凈DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。2.T載體與PCR產(chǎn)物的連接源DNA與載體分子的連接就是DNA重組，這樣重新組合的DNA叫做重組體或重組子。重組的DNA分子是在DNA連接酶的作用下，有Mg2+、ATP存在的連接緩沖系統中，將分別經(jīng)酶切的載...
原位雜交實(shí)驗1探針的設計與合成1)根據實(shí)驗室已有的p8基因cDNA全長(cháng)序列，用premierprimer5.0設計引物p81和p82，以鹵蟲(chóng)cDNA為模板，PCR擴增得到346bp的產(chǎn)物，用Takara膠回收試劑盒回收純化。引物編號引物序列長(cháng)度p81TGCGGACGAAACAGGAAG18bpp82GCTCAAACAGTGATGCCAGT20bp2)目的片段克隆a.在無(wú)菌離心管中加入連接載體的各種成分，載體與片段的摩爾比控制在1:3-1:8，根據凝膠電泳檢測后的濃度及載體與片...
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