降落PCR 

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降落 PCR（touchdown PCR），一種 PCR 技術(shù)，主要用于 PCR 的條件的優(yōu)化。在許多情

況下引物的設計使得PCR難以進(jìn)行，例如特異性不夠易錯配等。退火溫度過(guò)高會(huì )使PCR效

率過(guò)低，但退火溫度過(guò)低則會(huì )使非特異擴增過(guò)多。 

實(shí)驗材料: 

基因樣品 

儀器、耗材: 

PCR儀 

實(shí)驗步驟： 

1.  反應體積為50 μl。 

2.  人CD137胞膜外區基因的PCR擴增體系：CD137-pCDNA3質(zhì)粒4 μl，P1，P2各0.5 

μmol/L，MgCl2 2 mmol/L，dNTP 0.4 mmol/L，Taq 5 U。 

3.  hIgG1Fc片段的PCR擴增體系：含人hIgG1Fc的PGEM-T質(zhì)粒4 μl，P3、P4 各0.4 

μmol/L，MgCl2 2 mmol/L，dNTP 0.4 mmol/L，Taq 5 U。 

4.  HBVDNA多聚酶基因的PCR擴增體系： 

（1）Di一輪：HBVDNA模板4 μl，P5、P6各0.25 μmol/L，MgCl2 1.5 mmol/L，dNTP 

0.2 mmol/L，Taq 0.8 U. 

（2）第二輪：取5倍稀釋的Di一輪PCR產(chǎn)物4μl為模板，P7、P8各0.25 μmol/L，MgCl2 1.5 

mmol/L，dNTP 0.2 mmol/L，Taq 0.8 U。 

5.  分別在各滅菌PCR管加入上述各反應成分，100℃煮沸5 min，立即冰浴5 min，加入

TaqDNA聚合酶，混勻，離心，PCR程序如下： 

6.  取 10 μl PCR 擴增產(chǎn)物，在2%或3%瓊脂糖凝膠上電泳，紫外燈下觀(guān)察擴增產(chǎn)物。 

注意事項： 

由于目標是在較早的循環(huán)中避免低Tm 值配對，在TD—PCR中應用熱啟動(dòng)技術(shù)。設計

時(shí)，退火溫度的范圍應跨越15℃左右，從高于估計Tm 值至少幾度到低于它10℃