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技術(shù)|太上老君的煉丹爐：GPCRs的熱穩定技術(shù)作者：毛博（需要資料圖聯(lián)系超博小凌）*，G-蛋白偶聯(lián)受體（G-protein-coupledreceptors，GPCRs）是生物學(xué)和醫學(xué)上非常重要的膜蛋白，目前已經(jīng)有15種GPCRs的結構得以確定。但是，GPCRs的結構非常不穩定；GPCRs的序列非常難以測定，這就造成了研究的困難和瓶頸。如何精確快速地測定GPCRs的結構及其氨基酸序列一直是該領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)和焦點(diǎn)。為了解決這一難題，科學(xué)家們開(kāi)發(fā)出來(lái)一種全新的技術(shù)——熱穩定技術(shù)(...
姿勢|一文讀懂多基因表達系統MultiBac及其應用作者：毛博*，細胞中大多數蛋白質(zhì)以亞基的形式與其他蛋白質(zhì)裝配成蛋白質(zhì)復合體而發(fā)揮其生理功能。大分子蛋白復合物的結構和功能在后基因組時(shí)代已經(jīng)成為研究的焦點(diǎn)和熱點(diǎn)。然而，生產(chǎn)出足夠數量和高質(zhì)量的蛋白復合物是研究它們的結構和功能的前提。這同時(shí)也是一項非常困難和Ji具挑戰性的任務(wù)。為了克服這一難題，科學(xué)家們開(kāi)發(fā)出來(lái)一種強大的多基因重組表達技術(shù)——MultiBac。CELL里的一篇綜述就詳細解釋和闡述了這一Zui新的技術(shù)。什么是Mul...
想研究藥物口服吸收？Caco-2細胞模型來(lái)作者：葉軍Caco-2細胞轉運模型是被國外制藥企業(yè)以及實(shí)驗室應用的模擬腸道吸收的藥物篩選模型，已廣泛應用于藥物在小腸吸收的評價(jià)和轉運機制研究中。Caco-2細胞的結構和功能類(lèi)似于人小腸上皮細胞，含有與小腸刷狀邊緣上皮相關(guān)的酶系。與正常的成熟小腸上皮細胞在體外培育過(guò)程中出現的逆向分化不同，Caco-2細胞在多孔可滲透的聚碳酸酯膜上培養3周后可以自發(fā)分化為腸上皮細胞，形成致密的細胞單層，進(jìn)而可用作腸道轉運模型（圖1）。Caco-2細胞模型...
來(lái)個(gè)共享電子實(shí)驗記錄本，小組一起做記錄！作者：麥子實(shí)驗心得做實(shí)驗的時(shí)候總要帶著(zhù)protocol然后邊看邊做？給大鼠稱(chēng)完體重也要先記在草稿紙上回去再謄抄到本子上，再謄進(jìn)電腦里？一會(huì )紙弄濕了或記得太潦草導致數據混亂，就可能造成大問(wèn)題。我們講過(guò)的一個(gè)關(guān)于實(shí)驗可重復性的故事中，來(lái)自三個(gè)不同實(shí)驗室的研究者為了為排查不可重復的原因，對每個(gè)細節都加以控制，還做了一個(gè)App，使實(shí)驗記錄能及時(shí)記錄，避免各種意外的差錯。今天我們就來(lái)聊一下電子實(shí)驗記錄的事吧。當然不必刻意去找那三個(gè)學(xué)者為自己做的A...
一、定點(diǎn)突變的目的把目的基因上面的一個(gè)堿基換成另外一個(gè)堿基。二、定點(diǎn)突變的原理通過(guò)設計引物，并利用PCR將模板擴增出來(lái)，然后去掉模板，剩下來(lái)的就是我們的PCR產(chǎn)物，在PCR產(chǎn)物上就已經(jīng)把這個(gè)點(diǎn)變過(guò)來(lái)了，然后再轉化，篩選陽(yáng)性克隆，再測序確定就行了。三、引物設計原則引物設計的一般原則不再重復。突變引物設計的特殊原則：（1）通常引物長(cháng)度為25~45bp，我們建議引物長(cháng)度為30~35bp。一般都是以要突變的堿基為中心，加上兩邊的一段序列，兩邊長(cháng)度至少為11-12bp。若兩邊引物太短了...
動(dòng)物基因組DNA的提取[實(shí)驗原理]在EDTA和SDS等去污劑存在下，用蛋白酶K消化細胞，隨后用酚抽提，可以得到哺乳動(dòng)構基因組DNA，用此方法得到的DNA長(cháng)度為100-150kb，適用于L嘴菌體構建基因組文庫和Southern分析。通過(guò)本實(shí)驗了解并掌握提取基因組DNA的原理和步驟，以及相對分子質(zhì)量較大的DNA的瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)。[儀器、材料與試劑](一)儀器1.臺式離心機2.玻璃勻漿器3．高壓滅菌鍋4．恒溫水浴(二)材料1．1.5mL微量離心管2．微量取樣器和吸頭3．無(wú)菌過(guò)濾...
單核苷酸多態(tài)性（SNP）實(shí)驗SNP(SingleNucleotidePolymorphism)即單核苷酸多態(tài)性，是由于單個(gè)核苷酸改變而導致的核酸序列多態(tài)性(Polymorphism)。據估計，在人類(lèi)基因組中，大約每千個(gè)堿基中有一個(gè)SNP，無(wú)論是比較于度多態(tài)性(RFLP)分析還是微衛星標記(STR)，都要廣泛得多。實(shí)驗方法原理：SNP(SingleNucleotidePolymorphism)即單核苷酸多態(tài)性，是由于單個(gè)核苷酸改變而導致的核酸序列多態(tài)性(Polymorphism...
變性梯度凝膠電泳（DGGE）是一種根據DNA的片段的熔解性質(zhì)而使之分離的凝膠系統。核酸的雙螺旋結構在一定條件下可以解鏈，稱(chēng)之為變性。核酸50%發(fā)生變性時(shí)的溫度稱(chēng)為熔解溫度（Tm）。Tm值主要取決于DNA分子中GC含量的多少。DGGE將凝膠設置在雙重變性條件下：溫度50~60℃，變性劑0~100%。當一雙鏈DNA的片段通過(guò)一變性劑濃度呈梯度增加的凝膠時(shí)，此片段遷移至某一點(diǎn)變性劑濃度恰好相當于此段DNA的低熔點(diǎn)區的Tm值，此區便開(kāi)始熔解，而高熔點(diǎn)區仍為雙鏈。這種局部解鏈的DNA分...
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