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某個(gè)實(shí)驗間隙…
萌新:開(kāi)題報告已提交,轉眼1個(gè)月過(guò)去了,實(shí)驗還是一頭霧水,為啥我的co-IP拉不下來(lái)蛋白?
奮斗中的師兄:我當初正好相反,拉下來(lái)的蛋白被抗體條帶覆蓋住了,換個(gè)抗體忒不好找,無(wú)奈換了個(gè)蛋白,還好挺順利。
久經(jīng)沙場(chǎng)的大師兄:蛋白吧,不但種類(lèi)多,理化性質(zhì)差異較大,關(guān)鍵它們又喜歡組隊在細胞里干活,co-IP又是常用的手段,掌握好這個(gè)工具還是很重要的,總不能隨隨便便就換個(gè)蛋白。
IP、co-IP、pull-down簡(jiǎn)介
IP(Immunoprecipitation),免疫沉淀:是利用固定在磁珠或瓊脂糖樹(shù)脂等基質(zhì)上的特異性抗體對抗原進(jìn)行小型親和純化的一種方法。
Co-IP(co-Immunoprecipitation),免疫共沉淀: co-IP是一種常用的鑒定蛋白-蛋白相互作用的方法,其基本實(shí)驗流程和IP類(lèi)似,通過(guò)使用誘餌蛋白(IP中的抗原,bait protein)特異性抗體間接捕獲與其結合的靶蛋白(prey protein)。
Pull-down:另外一種進(jìn)行蛋白-蛋白相互作用研究的方法,針對無(wú)法找到可用的抗體的靶蛋白??梢圆捎靡粋€(gè)表位標記標記蛋白質(zhì)(可在細胞內組成型表達),將其固定在基質(zhì)上獲得互作蛋白。很多蛋白質(zhì)由于無(wú)法找到可用的抗體而無(wú)法進(jìn)行免疫沉淀。
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那要怎么快速掌握這項實(shí)驗
輕松搞定各種疑難雜癥呢?
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