活細胞熒光成像往往需要更長(cháng)時(shí)間的觀(guān)察和拍攝，對熒光信號的持久穩定要求更高。這就需要研究者要選用更明亮更穩定的熒光染料，如Invitrogen™ Molecular Probes™ 熒光標記試劑，同時(shí)盡可能優(yōu)化實(shí)驗條件。除此之外，提高活細胞成像的信噪比還可通過(guò)使用能減少細胞外背景熒光或增加標記熒光染料光穩定性的試劑進(jìn)行信號優(yōu)化。

降低背景熒光

    活細胞成像實(shí)驗中非常重要的一點(diǎn)是需要在專(zhuān)門(mén)的培養基中進(jìn)行成像。常規培養基含有酚紅可淬滅可見(jiàn)光波段的熒光染料，或含有自發(fā)熒光成分如核黃素等，都降低了信噪比。推薦使用活細胞成像培養基如Gibco™ FluroBrite™ DMEM或基于HEPES的Live Cell Imaging Solution，既能保持細胞健康同時(shí)又能大可能的降低或消除背景熒光。

No.01FluoroBrite™ DMEM培養基

      是一種基于DMEM配方的培養基，其背景熒光與PBS相當，與普通無(wú)酚紅DMEM培養基相比，其背景熒光降低了90%，同時(shí)賦予細胞健康生長(cháng)所需的營(yíng)養。

No.02Live Cell Imaging Solution

      一款由Molecular Probes專(zhuān)為活細胞成像應用開(kāi)發(fā)的光學(xué)透明的溶液，適用于成像觀(guān)察、染料標記和細胞洗滌多個(gè)步驟，可幫助細胞保持健康長(cháng)達 4 小時(shí)。

No.03BackDrop™ 背景抑制劑

      添加專(zhuān)門(mén)的與活細胞兼容的背景抑制劑也有助于減少細胞背景熒光。Invitrogen™ BackDrop™ 背景抑制劑（貨號B10512）適用于在藍色、綠色或紅色熒光通道中觀(guān)察到高背景信號或弱目標熒光信號時(shí)，可大大提升信噪比，且無(wú)需洗滌。

 增加熒光基團穩定性

       當熒光基團被頻繁曝光或長(cháng)時(shí)間照射時(shí)，往往會(huì )發(fā)生降解，降低熒光信號強度，同時(shí)產(chǎn)生自由基單線(xiàn)態(tài)氧進(jìn)一步降解臨近染料分子，從而可能造成熒光信號損失。加入的活細胞抗淬滅試劑ProLong™ Live（貨號P36974）可顯著(zhù)增強熒光基團的光穩定性。

 ProLong Live可有效增強多種熒光基團穩定性，成像時(shí)間延長(cháng)50% 以上。

nvitrogen™ ProLong™ Live抗淬滅試劑含有來(lái)自天然大腸桿菌質(zhì)膜的酶，只在細胞外工作而不進(jìn)入胞內，幾乎不影響細胞活力、細胞增殖及各種細胞功能，且使用便捷：

? 適用多種熒光基團：熒光蛋白, Hoechst, MitoTracker等

? 直接滴加即可，穩定信號長(cháng)達48h以上

? 對各種細胞功能無(wú)影響

? 可兼容任何培養基、緩沖液等

      除此之外，活細胞成像實(shí)驗中也要綜合優(yōu)化多種實(shí)驗條件以獲得蕞嘉信噪比，如選用合適穩定的熒光基團（Ex/Em與熒光顯微鏡匹配），兼顧實(shí)驗總時(shí)間、拍照頻率及熒光通道數等，上機觀(guān)察時(shí)儀器參數設置、調整光照時(shí)間和光照強度等等都要考慮。

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