人結腸癌細胞

LoVo（人結腸癌細胞）保種心得：

首先，細胞采購的運輸形式一般分為兩種，一種是直接寄送凍存細胞，一種是復蘇后寄送活細胞。前者是由液氮中取出細胞凍存管，采用干冰運輸；后者是將細胞復蘇至T-25培養瓶中，采用常溫運輸。兩者各有優(yōu)缺點(diǎn)，第1種方式的優(yōu)點(diǎn)是可以長(cháng)途運輸，因為細胞在干冰中相對穩定，一般可以保證數周之內不影響細胞活性，但缺點(diǎn)是運輸成本高，且細胞復蘇是很復雜的過(guò)程，如果細胞復蘇后狀態(tài)不佳，則很難界定是來(lái)源的問(wèn)題還是復蘇操作的問(wèn)題；而第二種方式的優(yōu)點(diǎn)是細胞收到后可以直接通過(guò)觀(guān)察來(lái)大體了解細胞狀態(tài)，并且對運輸的要求相對較低，缺點(diǎn)則是只適合短途運輸，因為即便運輸時(shí)培養基中不添加血清，細胞還是會(huì )不斷增殖，當細胞長(cháng)滿(mǎn)后，細胞的狀態(tài)會(huì )隨時(shí)間的增加而不斷變差。綜上，如果是從國外大型細胞庫采購，一般采用第1種方法，既能適應長(cháng)途運輸，且大型細胞庫的凍存細胞質(zhì)量普遍較hao，在良hao的操作下復蘇成活率很高；如果是從國內細胞庫采購，則一般采用第二種方法，方便收到細胞時(shí)能較hao掌握細胞狀態(tài)，并且降低運輸成本。

LoVo（人結腸癌細胞）分別針對兩種運輸方式來(lái)談下對新細胞的處理過(guò)程：

對于直接寄送凍存細胞的情況，首先要檢查的就是細胞收到后是否有足量剩余干冰，如果干冰不足，或是已經(jīng)沒(méi)有干冰，則細胞狀態(tài)可能會(huì )收到影響，建議盡快復蘇；如果有足量干冰，建議先轉移至-80℃冰箱過(guò)夜，于第二天按正常流程復蘇，即37℃水浴鍋中快速融解，低速離心后去除含DMSO的凍存液，換入適合細胞的新鮮培養基，輕柔吹勻后轉移至培養皿中，補足培養基；一般貼壁細胞在24h內即可觀(guān)察到細胞貼壁，從而判斷細胞狀態(tài)，懸浮細胞則復蘇后即可觀(guān)察細胞狀態(tài)。對于凍存時(shí)間較長(cháng)的細胞，可能需要傳代1到2次后，細胞才會(huì )調整到正常狀態(tài)，所以細胞復蘇后如果狀態(tài)不佳，不要灰心，仍要細心培養。

對于復蘇后寄送活細胞的情況，則細胞收到后要先檢查細胞瓶是否有破損，細胞瓶在運輸中很有可能受到碰撞和擠壓，導致瓶體受損。如果發(fā)現細胞瓶受損，則需要盡快處理，該棄就棄。如果細胞瓶完hao，則用酒精消毒瓶身，去除封口膜，然后置于37℃培養箱中靜置1-2h。待細胞穩定后，觀(guān)察細胞狀態(tài)，并及時(shí)記錄，因為很多國內細胞庫都是可以反饋細胞狀態(tài)的，如果收到時(shí)細胞狀態(tài)不佳甚至污染，是可以要求重新寄送的。細胞如沒(méi)有異常，則盡快傳代并更換適合細胞的新鮮培養基。由于新細胞一般都是第1次接觸，細胞傳代過(guò)程中尤為需要注意胰酶消化時(shí)間，消化時(shí)間過(guò)短或過(guò)長(cháng)都會(huì )影響細胞狀態(tài)，甚至導致細胞死亡。我建議大家采用低濃度胰酶消化，消化時(shí)縮短放培養箱和觀(guān)察的間隔時(shí)間，以便盡可能找到合適的消化時(shí)間。