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人正常肝細胞

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人正常肝細胞傳代1.用75%酒精噴灑整個(gè)培養瓶消毒,將其平躺置于培養箱中進(jìn)行1-3小時(shí)的緩沖,.然后置于無(wú)菌操作臺,打開(kāi)瓶口,將其中的培養液去掉,再往其中加入5-6mL新鮮培養基(以T25培養瓶為例)并置于細胞培養箱中培養,根據細胞生長(cháng)狀況及培養基顏色變化對其進(jìn)行換液以及傳代,一般2天換一次液;

2.待細胞長(cháng)滿(mǎn)瓶底面積80%,需要對其進(jìn)行傳代,傳代比例為1:2到1:3;

3傳代步驟:將0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于室溫預熱,倒掉培養瓶中的培養基,往培養瓶中加入3-5 ml PBS,輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1-2 ml預熱好的胰酶,置于室溫孵育消化(*次消化需置于顯微鏡下觀(guān)察,以顯微鏡下細胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見(jiàn)細胞脫落為zui佳消化時(shí)間,記錄zui佳消化時(shí)間,以便于下次消化),消化好后加入3ml*培養基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細胞,使之*脫落,然后收集細胞懸液,1000rpm離心3min,棄上清,加入*培養基重懸細胞,進(jìn)行傳代。(具體根據隨貨說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作)

 

人正常肝細胞凍存條件:*培養基+FBS+DMSO

(備注:建議使用本公司的培養條件,用4度保存的冷凍液直接重懸細胞,不能預熱后使用。)

保存條件:液氮存儲

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