小鼠黑色素瘤高轉細胞

小鼠黑色素瘤高轉細胞傳代說(shuō)明：

1.用75%酒精噴灑整個(gè)培養瓶消毒，將其平躺置于培養箱中進(jìn)行1-3小時(shí)的緩沖，.然后置于無(wú)菌操作臺，打開(kāi)瓶口，將其中的培養液去掉，再往其中加入5-6mL新鮮培養基(以T25培養瓶為例)并置于細胞培養箱中培養，根據細胞生長(cháng)狀況及培養基顏色變化對其進(jìn)行換液以及傳代，一般2到3天換一次液；

2.待細胞長(cháng)滿(mǎn)瓶底面積80%-90%，需要對其進(jìn)行傳代，傳代比例為1:3到1:8；

3傳代步驟：將0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°預熱，倒掉培養瓶中的培養基，往培養瓶中加入3-5 ml PBS，輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1-2 ml預熱好的胰酶，置于37°孵育消化（次消化需時(shí)常取出置于顯微鏡下觀(guān)察，以顯微鏡下細胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見(jiàn)細胞脫落為*消化時(shí)間，記錄*消化時(shí)間，以便于下次消化），消化好后加入3ml*培養基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細胞，使之*脫落，然后收集細胞懸液，1200rpm離心3min，棄上清，加入*培養基重懸細胞，進(jìn)行傳代。

保存說(shuō)明：

凍存條件：80%*培養基+10%FBS+10%DMSO

(備注：建議使用本公司的冷凍液（H-W-100），用4度保存的冷凍液直接重懸細胞，不能預熱后使用。)

保存條件：液氮存儲

小鼠黑色素瘤高轉細胞常見(jiàn)問(wèn)題說(shuō)明：

1.培養瓶有破裂，培養液有漏液：細胞極大可能會(huì )污染，所以我們會(huì )及時(shí)安排幫老師解決。

2.收到細胞后盡快更換為含 10%血清的新鮮培養基，如因特殊情況需要繼續使用原瓶培養基，請在原瓶培養基中額外添加 10%的血清（原瓶培養基的繼續使用時(shí)間zui長(cháng)不宜超過(guò) 72 小時(shí)）

3.細胞漂?。号囵B瓶不開(kāi)封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養箱。1-2小時(shí)后觀(guān)察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以去掉，留8-10ml培養液培養觀(guān)察，細胞生長(cháng)至匯合度80%，進(jìn)行消化傳代；如細胞還是不貼壁，將細胞離心收集轉到新培養瓶，原培養瓶加部分培養液繼續培養，中間注意觀(guān)察，我們的技術(shù)人員會(huì )一直跟蹤指導，直到問(wèn)題解決。