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品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 一周 |
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應用領(lǐng)域 | 醫療衛生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農業(yè) |
人宮頸癌細胞DDP耐藥株操作流程
1、收到SiHa/DDP人宮頸癌細胞耐藥株后,請按照以下方法進(jìn)行操作:
取出25cm2培養瓶,75%酒精擦拭培養瓶,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2細胞培養箱中靜置3-4小時(shí)以穩定細胞狀態(tài),然后換用新鮮*培養液繼續培養或進(jìn)行傳代。
2、細胞傳代:
1)細胞生長(cháng)至覆蓋培養瓶的80%面積時(shí),棄25cm2培養瓶中的培養液,用PBS清洗細胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中,倒置顯微鏡下觀(guān)察,待細胞回縮變圓后加入*培養液終止消化,再輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉移至15ml離心管中,1000rpm離心5min;
3)棄上清,沉淀細胞用12ml*培養基重懸,然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代,*后放入37℃,5%CO2細胞培養箱中培養;
4)待細胞*貼壁后,觀(guān)察培養結果,之后進(jìn)行換液培養或傳代。
3、細胞凍存:
1)細胞生長(cháng)至覆蓋培養瓶的80%面積時(shí),棄25cm2培養瓶中的培養液,用PBS清洗細胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中,倒置顯微鏡下觀(guān)察,待細胞回縮變圓后加入*培養液終止消化,輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉移至15ml離心管中,1000rpm離心5min;
3)用適量的凍存液(FBS:DMSO=9 :1)重懸細胞,并放置于凍存管中;
4)先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,然后將其移入-80℃過(guò)夜,24h后轉入液氮中進(jìn)行長(cháng)期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。
4、細胞復蘇:
1)從液氮中取出細胞凍存管(注意:佩戴防爆管面具),快速將其置入37℃水浴中解凍,直至凍存管中無(wú)結晶,然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁;
2)將凍存管中的細胞移至含5ml*培養基的15ml離心管中, 1000rpm離心5min;
3)棄上清,沉淀用5ml*培養基重懸,接種25cm2培養瓶,于37℃,5%CO2細胞培養箱中培養;
4)第二天,換用新鮮*培養基繼續培養。人宮頸癌細胞DDP耐藥株
上一產(chǎn)品:skov3/ddp人卵巢癌細胞DDP耐藥株
下一產(chǎn)品:B16-F10小鼠黑色素瘤高轉細胞
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