人宮頸癌細胞DDP耐藥株

人宮頸癌細胞DDP耐藥株操作流程

1、收到SiHa/DDP人宮頸癌細胞耐藥株后，請按照以下方法進(jìn)行操作：

取出25cm²培養瓶，75%酒精擦拭培養瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO₂細胞培養箱中靜置3-4小時(shí)以穩定細胞狀態(tài)，然后換用新鮮*培養液繼續培養或進(jìn)行傳代。

2、細胞傳代：

1）細胞生長(cháng)至覆蓋培養瓶的80%面積時(shí)，棄25cm²培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀(guān)察，待細胞回縮變圓后加入*培養液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀細胞用12ml*培養基重懸，然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代，*后放入37℃，5%CO₂細胞培養箱中培養；

4）待細胞*貼壁后，觀(guān)察培養結果，之后進(jìn)行換液培養或傳代。

3、細胞凍存：

1）細胞生長(cháng)至覆蓋培養瓶的80%面積時(shí)，棄25cm²培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀(guān)察，待細胞回縮變圓后加入*培養液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過(guò)夜，24h后轉入液氮中進(jìn)行長(cháng)期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。 

4、細胞復蘇：
1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無(wú)結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2）將凍存管中的細胞移至含5ml*培養基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀用5ml*培養基重懸，接種25cm²培養瓶，于37℃，5%CO₂細胞培養箱中培養；

4）第二天，換用新鮮*培養基繼續培養。人宮頸癌細胞DDP耐藥株