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U937細胞高效率轉染條件分享
一、轉染材料準備
1. 轉染試劑用量:10ul
2. DNA/siRNA濃度:電訊
3. 細胞密度:1*106-1*105
4. 轉染用培養板:6孔板
5. 轉染試劑:zeta life ,Advanced DNA RNA轉染試劑;貨號:AD600025
6. 轉染時(shí)間:15小時(shí)
7. 細胞培養胎牛血清:Z7181FBS-500胎牛血清
8. 細胞凍存液:L0100無(wú)血清細胞凍存液
注意:本細胞轉染用量條件不適合lipo使用。
操作過(guò)程:
1.提前1天接種細胞:細胞匯合度在60-80%左右,再進(jìn)行轉染。
2. 核酸復合物制備:將核酸與轉染試劑按照比例關(guān)系直接混合,用移液器吹打、混勻,室溫靜止15分鐘。
3.在細胞培養基中加入核酸復合物:根據參考用量在細胞中加入核酸復合物,并輕輕混勻;細胞培養基里面可以含有血清。
4.細胞換液:轉染24小時(shí)后對細胞進(jìn)行正常換液,懸浮細胞轉染過(guò)程中不用換液。
5.分析結果:質(zhì)粒DNA轉染48-72小時(shí)后熒光檢測轉染效率,48-96小時(shí)檢測mRNA或蛋白表達。若進(jìn)行穩定表達細胞株的篩選,則在轉染后24-48小時(shí)左右加入適量的藥物進(jìn)行篩選。siRNA轉染后9小時(shí)熒光檢測轉染效率,48-72小時(shí)檢測mRNA或蛋白表達。
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