熒光定量是在常規PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來(lái)實(shí)現其定量功能的。其原理：隨著(zhù)PCR反應的進(jìn)行，熒光定量反應產(chǎn)物不斷累計，熒光信號強度也等比例增加。每經(jīng)過(guò)一個(gè)循環(huán)，收集一個(gè)熒光強度信號，這樣我們就可以通過(guò)熒光強度變化監測產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴增曲線(xiàn)圖。

　　一般而言，熒光擴增曲線(xiàn)可以分成三個(gè)階段：熒光背景信號階段，熒光信號指數擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺期，擴增產(chǎn)物已不再呈指數級的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒(méi)有線(xiàn)性關(guān)系，根據熒光定量產(chǎn)物量也不能計算出起始DNA拷貝數。只有在熒光信號指數擴增階段，熒光定量產(chǎn)物量的對數值與起始模板量之間存在線(xiàn)性關(guān)系，我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便，在實(shí)時(shí)熒光定量技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念：熒光閾值和CT值。

　　熒光定量的檢測：

　　熒光定量檢測根據所使用的標記物不同可分為熒光探針和熒光染料。熒光探針又包括Beacon技術(shù)、TaqMan探針和FRET技術(shù)等；熒光染料包括飽和熒光染料和非飽和熒光染料，非飽和熒光染料的典型代表就是現在常；飽和熒光染料有EvaGreen、LCGreen等。