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人急性T淋巴細胞白血病細胞

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人急性T淋巴細胞白血病細胞

1. 人急性T淋巴細胞白血病細胞液體培養基的保存是冷藏好?還是冷凍好?

  要冷藏??!因為液體培養基經(jīng)冷凍后再經(jīng)溶化時(shí),其溶液的pH值會(huì )發(fā)生改變,溶液往往變堿,某些成分溶解也會(huì )受到影響對細胞生長(cháng)不利。故液體培養基一定要存放在冷藏箱中,通常液體培養基在冷藏條件下可存放6個(gè)月 ~ 一年。

  2.人急性T淋巴細胞白血病細胞 液體培養基中谷氨酰胺的作用,及使用方法。

  幾乎所有的細胞對谷氨酰胺有較高的要求,細胞需要谷氨酰胺合成蛋白質(zhì),在缺少谷氨酰胺時(shí),細胞生長(cháng)不良而死亡。所以,各種培養液中都含有較大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不穩定,應置-20 ?C冰凍保存,用前加入培養基中。加有谷氨酰胺的液體培養基4 ?C 冰箱儲存兩周以上時(shí),應重新加入原來(lái)量的谷氨酰胺?;A醫學(xué)細胞中心在其服務(wù)項目中配制分裝了高濃度(100倍)的谷氨酰胺溶液(1ml/支)。每支1ml的谷氨酰胺加到99ml*培養基中,其終濃度為2mM/ml培養基。包裝為粉紅色,-24?C保存。

  3. 人急性T淋巴細胞白血病細胞 培養用液pH對細胞生長(cháng)的影響

  由于,大多數細胞適宜pH為7.2~7.4,偏離此范圍對細胞將產(chǎn)生有害的影響。各種細胞對pH的要求也不*相同,原代培養細胞一般對pH變動(dòng)耐受差,無(wú)限細胞系耐受力強。

  但總體來(lái)說(shuō),細胞耐酸性比耐堿性強一些,偏酸環(huán)境中更利于細胞生長(cháng)。因此,我們在配制培養用液時(shí),可把液體的pH稍微調得偏酸一些。液體在經(jīng)過(guò)0.10um或0.22um濾膜過(guò)濾時(shí),溶液的pH還會(huì )向上浮動(dòng)0.2左右。

  4.人急性T淋巴細胞白血病細胞 細胞傳代消化時(shí)所用胰酶濃度越高越好嗎?

  不見(jiàn)得!因為胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、溫度、胰酶濃度及溶液中是否含有Ca++, Mg++離子和血清等因素有關(guān)。通常情況下,pH 8.0 , 溫度 37 oC 其作用能力zui強。另外,鈣、鎂離子及血清均能大大降低其消化能力。我們每次進(jìn)行傳代消化前,一定要用D-Hanks液或PBS液反復沖洗細胞培養瓶,以便于將含血清的培養基沖洗干凈,這樣就能大大提高消化液的消化能力。本中心通常使用的消化液濃度為:

 ?。?)0.05%胰蛋白酶+0.02%EDTA;

 ?。?)0.25%胰蛋白酶+0.03%EDTA。

 ?。?)0.25% 胰蛋白酶

  溶液pH8.0~9.0;使用D-Hank液配制。

  多數細胞傳代消化可使用0.05%胰蛋白酶+0.02%EDTA這種消化液。
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