人甲狀腺癌細胞

當B-CPAP人甲狀腺癌細胞B-CPAP密度達到傳代密度且細胞活性在90%以上時(shí)，可以?xún)龃婕毎?，在超凈臺中將要凍存的細胞移入離心管，1000rpm離心5min，棄上清，用90%培養液+10%DMSO的混合液重懸細胞，并調整細胞密度為4-6×106/ml，將細胞懸液分裝到凍存管中(1-1.5ml/管)。

含量：>1x10⁶ 個(gè)/mL，  規格：T75瓶或者1mL凍存管包裝

培養基：人甲狀腺癌細胞B-CPAP*培養基配方（100 ml）： RPMI-1640 (Invitrogen,11875093) 89 ml FBS (Gibco) 10 ml NEAA(Invitrogen, 11140) 1 ml 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度。

生長(cháng)特性：貼壁生長(cháng)

污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

運輸和保存：可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式：（1）干冰運輸，收到后立即轉入液氮凍存或直接復蘇；（2）存活細胞，收到后應繼續生長(cháng)，傳代達到細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細胞培養步驟。

B-CPAP人甲狀腺癌細胞B-CPAP傳代操作步驟：

一、貼壁細胞傳代

1.提前將培養基、PBS放入37℃水浴鍋內預熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內。

2.吸除或倒掉細胞瓶?jì)扰f培養液，加少量PBS潤洗細胞。

3.加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀(guān)察，待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶，加入新鮮培養基，晃動(dòng)細胞瓶，終止胰酶作用。

4.B-CPAP人甲狀腺癌細胞B-CPAP用吸管小心吹打貼壁的細胞，制成細胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡。

5.將細胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細胞瓶?jì)?，加入新鮮培養基，置37℃溫箱培養，隔天觀(guān)察貼壁生長(cháng)情況。

二、懸浮細胞傳代

1.將細胞懸液轉移到無(wú)菌離心管內，1000rpm離心5min。

2.棄去上清，加入新鮮的培養基，用吸管小心吹散沉淀，制成細胞懸液。

3.將細胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細胞瓶?jì)?，加入新鮮培養基，置37℃溫箱培養。

B-CPAP人甲狀腺癌細胞B-CPAP 培養的過(guò)程中，經(jīng)常見(jiàn)到黑色的顆?；蛐『邳c(diǎn)，這種情況是怎么引起的呢？該怎么避免呢？原因：

黑點(diǎn)，大概有細胞本身帶的，環(huán)境有的，還有人身上帶進(jìn)細胞間的,還有就是血清和培養基

1、如果小黑點(diǎn)有增殖趨勢，那么就有可能是污染了，需要處理；

2、如果小黑點(diǎn)沒(méi)有增殖趨勢，且不影響細胞生長(cháng)，也不影響實(shí)驗的話(huà)，則可能

 a、是“黑膠蟲(chóng)”，黑膠蟲(chóng)究竟是一種生物還是非生物，本身就存在爭議。有人認為是從血清中來(lái)的一種原蟲(chóng)，也有人認為是細菌，或是真菌，也有人認為是血清中的蛋白的結晶。“黑膠蟲(chóng)”可寄生于動(dòng)物細胞，也可以生存于培養基中，依靠B-CPAP人甲狀腺癌細胞B-CPAP和培養基中的營(yíng)養為生，并隨細胞傳代而傳代。“黑膠蟲(chóng)”與細胞競爭性生長(cháng)，開(kāi)始時(shí)對細胞并沒(méi)有什么影響，但當黑膠蟲(chóng)的數量多到一定程度的時(shí)候， 細胞生長(cháng)就會(huì )受到影響直至死亡，嚴重影響了科研活動(dòng)的開(kāi)展和進(jìn)行。以前（這個(gè)至少是10年以前），很多實(shí)驗室在養細胞時(shí)用國產(chǎn)血清，那時(shí)的血清可能質(zhì)量不過(guò)關(guān)，有所謂的“黑膠蟲(chóng)”，但是也沒(méi)有明確的鑒定。但是現在的血清，即使國產(chǎn)的，產(chǎn)品里這種現象就少見(jiàn)了。

 b、是細胞碎片，或血清里德沉淀析出，在做布朗運動(dòng)。

 c、是核糖體，也可能是雜質(zhì)PH-pc-h082    膀胱成纖維細胞    Bladderfibroblastscells    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養條件：MEM/F12 +10% FBS 
PH-pc-h083    尿道上皮細胞    Urothelial cells    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養條件：MEM/F12 +10% FBS 
PH-pc-h084    腎足突細胞    Renal podocytes    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養條件：MEM/F12 +10% FBS 
PH-pc-h085    胎盤(pán)羊膜細胞    Placental amniotic cells    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養條件：MEM/F12 +10% FBS 
PH-pc-h086    胎盤(pán)滋養層細胞    Placental trophoblast cells    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養條件：MEM/F12 +10% FBS 
PH-pc-h087    胎盤(pán)絨毛膜細胞    Placental chorionic cells    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養條件：MEM/F12 +10% FBS 
PH-pc-h088    子宮平滑肌細胞    Uterine smooth muscle cells    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養條件：MEM/F12 +10% FBS 
PH-pc-h089    子宮成纖維細胞    Uterinefibroblastscells    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養條件：MEM/F12 +10% FBS 
PH-pc-h090    卵巢上皮細胞    Uterine smooth muscle cells    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養條件：MEM/F12 +10% FBS 
PH-pc-h091    卵巢成纖維細胞    Ovary fibroblasts    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養條件：MEM/F12 +10% FBS