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人甲狀腺癌細胞

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B-CPAP人甲狀腺癌細胞B-CPAP密度達到傳代密度且細胞活性在90%以上時(shí),可以?xún)龃婕毎?,在超凈臺中將要凍存的細胞移入離心管,1000rpm離心5min,棄上清,用90%培養液+10%DMSO的混合液重懸細胞,并調整細胞密度為4-6×106/ml,將細胞懸液分裝到凍存管中(1-1.5ml/管)。

含量:>1x106 個(gè)/mL,  規格:T75瓶或者1mL凍存管包裝

培養基:人甲狀腺癌細胞B-CPAP*培養基配方(100 ml): RPMI-1640 (Invitrogen,11875093) 89 ml FBS (Gibco) 10 ml NEAA(Invitrogen, 11140) 1 ml 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度。

生長(cháng)特性:貼壁生長(cháng)

污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

運輸和保存:可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式:(1)干冰運輸,收到后立即轉入液氮凍存或直接復蘇;(2)存活細胞,收到后應繼續生長(cháng),傳代達到細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí),再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細胞培養步驟。

B-CPAP人甲狀腺癌細胞B-CPAP傳代操作步驟:

一、貼壁細胞傳代

1.提前將培養基、PBS放入37℃水浴鍋內預熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內。

2.吸除或倒掉細胞瓶?jì)扰f培養液,加少量PBS潤洗細胞。

3.加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀(guān)察,待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶,加入新鮮培養基,晃動(dòng)細胞瓶,終止胰酶作用。

4.B-CPAP人甲狀腺癌細胞B-CPAP用吸管小心吹打貼壁的細胞,制成細胞懸液??刂拼荡虻牧Χ?,避免產(chǎn)生大量的氣泡。

5.將細胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細胞瓶?jì)?,加入新鮮培養基,置37℃溫箱培養,隔天觀(guān)察貼壁生長(cháng)情況。

二、懸浮細胞傳代

1.將細胞懸液轉移到無(wú)菌離心管內,1000rpm離心5min。

2.棄去上清,加入新鮮的培養基,用吸管小心吹散沉淀,制成細胞懸液。

3.將細胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細胞瓶?jì)?,加入新鮮培養基,置37℃溫箱培養。

B-CPAP人甲狀腺癌細胞B-CPAP 培養的過(guò)程中,經(jīng)常見(jiàn)到黑色的顆?;蛐『邳c(diǎn),這種情況是怎么引起的呢?該怎么避免呢?原因:

黑點(diǎn),大概有細胞本身帶的,環(huán)境有的,還有人身上帶進(jìn)細胞間的,還有就是血清和培養基

1、如果小黑點(diǎn)有增殖趨勢,那么就有可能是污染了,需要處理;

2、如果小黑點(diǎn)沒(méi)有增殖趨勢,且不影響細胞生長(cháng),也不影響實(shí)驗的話(huà),則可能

 a、是“黑膠蟲(chóng)”,黑膠蟲(chóng)究竟是一種生物還是非生物,本身就存在爭議。有人認為是從血清中來(lái)的一種原蟲(chóng),也有人認為是細菌,或是真菌,也有人認為是血清中的蛋白的結晶。“黑膠蟲(chóng)”可寄生于動(dòng)物細胞,也可以生存于培養基中,依靠B-CPAP人甲狀腺癌細胞B-CPAP和培養基中的營(yíng)養為生,并隨細胞傳代而傳代。“黑膠蟲(chóng)”與細胞競爭性生長(cháng),開(kāi)始時(shí)對細胞并沒(méi)有什么影響,但當黑膠蟲(chóng)的數量多到一定程度的時(shí)候, 細胞生長(cháng)就會(huì )受到影響直至死亡,嚴重影響了科研活動(dòng)的開(kāi)展和進(jìn)行。以前(這個(gè)至少是10年以前),很多實(shí)驗室在養細胞時(shí)用國產(chǎn)血清,那時(shí)的血清可能質(zhì)量不過(guò)關(guān),有所謂的“黑膠蟲(chóng)”,但是也沒(méi)有明確的鑒定。但是現在的血清,即使國產(chǎn)的,產(chǎn)品里這種現象就少見(jiàn)了。

 b、是細胞碎片,或血清里德沉淀析出,在做布朗運動(dòng)。

 c、是核糖體,也可能是雜質(zhì)PH-pc-h082    膀胱成纖維細胞    Bladderfibroblastscells    形態(tài):貼壁,懸浮均有;上皮細胞樣    培養條件:MEM/F12 +10% FBS 
PH-pc-h083    尿道上皮細胞    Urothelial cells    形態(tài):貼壁,懸浮均有;上皮細胞樣    培養條件:MEM/F12 +10% FBS 
PH-pc-h084    腎足突細胞    Renal podocytes    形態(tài):貼壁,懸浮均有;上皮細胞樣    培養條件:MEM/F12 +10% FBS 
PH-pc-h085    胎盤(pán)羊膜細胞    Placental amniotic cells    形態(tài):貼壁,懸浮均有;上皮細胞樣    培養條件:MEM/F12 +10% FBS 
PH-pc-h086    胎盤(pán)滋養層細胞    Placental trophoblast cells    形態(tài):貼壁,懸浮均有;上皮細胞樣    培養條件:MEM/F12 +10% FBS 
PH-pc-h087    胎盤(pán)絨毛膜細胞    Placental chorionic cells    形態(tài):貼壁,懸浮均有;上皮細胞樣    培養條件:MEM/F12 +10% FBS 
PH-pc-h088    子宮平滑肌細胞    Uterine smooth muscle cells    形態(tài):貼壁,懸浮均有;上皮細胞樣    培養條件:MEM/F12 +10% FBS 
PH-pc-h089    子宮成纖維細胞    Uterinefibroblastscells    形態(tài):貼壁,懸浮均有;上皮細胞樣    培養條件:MEM/F12 +10% FBS 
PH-pc-h090    卵巢上皮細胞    Uterine smooth muscle cells    形態(tài):貼壁,懸浮均有;上皮細胞樣    培養條件:MEM/F12 +10% FBS 
PH-pc-h091    卵巢成纖維細胞    Ovary fibroblasts    形態(tài):貼壁,懸浮均有;上皮細胞樣    培養條件:MEM/F12 +10% FBS 

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