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人膀胱癌細胞(T24衍生物)

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人膀胱癌細胞(T24衍生物)傳代:

1.用75%酒精噴灑整個(gè)培養瓶消毒,將其平躺置于培養箱中進(jìn)行1-3小時(shí)的緩沖,.然后置于無(wú)菌操作臺,打開(kāi)瓶口,將其中的培養液去掉,再往其中加入5-6mL新鮮培養基(以T25培養瓶為例)并置于細胞培養箱中培養,根據細胞生長(cháng)狀況及培養基顏色變化對其進(jìn)行換液以及傳代,一般2到3天換一次液;

2.待細胞長(cháng)滿(mǎn)瓶底面積80%-90%,需要對其進(jìn)行傳代,傳代比例為1:3到1:6;

3傳代步驟:將0.25%胰酶-0.53 mM?EDTA消化液置于37°預熱,倒掉培養瓶中的培養基,往培養瓶中加入3-5 ml PBS,輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1-2 ml預熱好的胰酶,置于37°孵育消化(第1次消化需時(shí)常取出置于顯微鏡下觀(guān)察,以顯微鏡下細胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見(jiàn)細胞脫落為zui佳消化時(shí)間,記錄zui佳消化時(shí)間,以便于下次消化),消化好后加入3ml*培養基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細胞,使之*脫落,然后收集細胞懸液,1200rpm離心3min,棄上清,加入*培養基重懸細胞,進(jìn)行傳代。

人膀胱癌細胞(T24衍生物)常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案:

1.培養瓶有破裂,培養液有漏液:細胞極大可能會(huì )污染,所以我們會(huì )及時(shí)安排幫老師解決。

2.收到細胞后盡快更換為含?10%血清的新鮮培養基,如因特殊情況需要繼續使用原瓶培養基,請在原瓶培養基中額外添加?10%的血清(原瓶培養基的繼續使用時(shí)間zui長(cháng)不宜超過(guò)?72?小時(shí))

3.細胞漂?。号囵B瓶不開(kāi)封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養箱。1-2小時(shí)后觀(guān)察,如細胞大部分又貼回瓶底,表明細胞活力正常,剩余漂浮的細胞可以去掉,留8-10ml培養液培養觀(guān)察,細胞生長(cháng)至匯合度80%,進(jìn)行消化傳代;如細胞還是不貼壁,將細胞離心收集轉到新培養瓶,原培養瓶加部分培養液繼續培養,中間注意觀(guān)察,我們的技術(shù)人員會(huì )一直跟蹤指導,直到問(wèn)題解決。

 

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