人膀胱癌細胞

人膀胱癌細胞使用方法：

一，燒瓶培養的處理程序

在培養瓶中接種細胞并在培養基中*填充培養基以防止運輸過(guò)程中細胞的丟失。

1、收到后，目視檢查培養物是否有微生物污染的宏觀(guān)證據。

使用倒置顯微鏡（配備有相位傳感器），仔細檢查是否有微生物污染的證據。還檢查以確定大多數細胞是否仍然附著(zhù)在燒瓶底部？在運輸過(guò)程中，培養物有時(shí)被粗略地處理，并且許多細胞經(jīng)常分離并懸浮在培養基中（但仍然是可行的）。

2、如果細胞仍然附著(zhù)，無(wú)菌去除5至10毫升的運輸介質(zhì)?？梢怨澥∵\輸媒介以重復使用。在5%℃的空氣中，在37℃下培養細胞，直到它們準備進(jìn)行傳代培養BGC-823人胃腺癌細胞（低分化）沒(méi)有附著(zhù)，無(wú)菌地移除燒瓶的全部?jì)热菸?，并?000rpm離心5至10分鐘。取出運輸介質(zhì)并保存。在10毫升這種培養基中重新沉淀顆粒細胞并加入25厘米的燒瓶中。在空氣中5%℃下，在37℃下孵育，直至細胞準備進(jìn)行傳代培養。

二、傳代程序

體積為75厘米的燒瓶。增加或減少其他尺寸培養容器所需的分離培養基的量。

1、去除和丟棄培養基。

2.用0.25%(w/v)胰蛋白酶0.53mM EDTA溶液沖洗細胞層，除去所有含有胰蛋白酶抑制劑的血清痕跡。

3.添加2.0~3.0 ml胰酶-EDTA溶液瓶中，倒置顯微鏡下觀(guān)察細胞到細胞層分散（取決于胰蛋白酶的批）。

注意：為了避免結塊，不要在擊打或搖晃瓶子時(shí)攪拌細胞，等待細胞分離。難以分離的細胞可以放置在37°C以促進(jìn)擴散。

4、加入6～8毫升的完整生長(cháng)培養基，輕輕吸液，抽吸細胞。

5、在新培養容器中加入適當的細胞懸液等分試樣。

6、培養37°C培養基。

推薦栽培比為1:3∶1:4。

介質(zhì)更新：每周2至3次

三、人膀胱癌細胞冷凍保存程序

該協(xié)議使用量在75平方厘米的瓶；比例減少或增加的其他尺寸的分離介質(zhì)的培養容器的數量。

1、去除和丟棄培養基。

2。簡(jiǎn)要沖洗細胞層0.25（w/v）trypsin0.53mm EDTA溶液去除所有痕跡血清含有胰蛋白酶抑制劑。

3。加入2至3毫升的胰蛋白酶-EDTA溶液瓶中，倒置顯微鏡下觀(guān)察細胞到細胞層是分散的（通常在1到10分鐘）。

注意：為了避免結塊，不要在擊打或搖晃瓶子時(shí)攪拌細胞，等待細胞分離。難以分離的細胞可以放置在37°C以促進(jìn)擴散。

4、加入6～8毫升的完整生長(cháng)培養基，輕輕吸液，抽吸細胞。

5。去除胰酶EDTA溶液，將細胞懸液到離心管和旋轉約5 1000rpmfor 10分鐘。

6、低溫保存培養液中的上清液和復蘇細胞。

7、將細胞轉移至低溫瓶，1ml／瓶。

8、低溫容器中的細胞Frozen（NalgENα5100-01）。