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應用領(lǐng)域 | 醫療衛生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農業(yè) |
人組織細胞淋巴瘤細胞培養步驟
一.培養基及培養凍存條件準備:
1) 準備基礎培養基( GIBCO,,添加NaHCO3 1.5g/L,丙酮酸鈉 0.11g/L);優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過(guò)夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過(guò)夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) U937人組織細胞淋巴瘤細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細胞凍存。貼壁細胞凍存時(shí),棄去培養基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。
人組織細胞淋巴瘤細胞注意事項:
1.收到細胞后首先觀(guān)察細胞瓶是否完好,培養液是否有漏液、渾濁等現象,若有上述現象發(fā)生請及時(shí)和我們聯(lián)系。
2.先不開(kāi)瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養箱靜置數小時(shí)(4h左右),穩定細胞狀態(tài),切忌在溫箱內靜置過(guò)夜。
3.靜置后鏡檢,拍照,記錄細胞狀態(tài)。建議傳代后也拍照記錄細胞生長(cháng)情況。
4. 懸浮細胞:將細胞瓶?jì)纫后w都轉移至無(wú)菌離心管內,1000 轉/分鐘離心5min,培養基上清可備用,管底細胞沉淀用培養基重懸。鏡檢時(shí)若細胞密度超過(guò)80%,可將細胞懸液分至2個(gè)細胞瓶?jì)扰囵B;若密度未超過(guò)80%,細胞懸液移至原瓶繼續培養,待達到80%時(shí)再正常傳代。備注:聚團生長(cháng)慢,有密度依賴(lài),必須使用T25培養瓶豎立培養,3天一次半量換液一次,1-2周傳代一次。
貼壁細胞:若細胞密度超過(guò)80%,可正常傳代;若未超過(guò)80%,收集細胞瓶?jì)鹊呐囵B基,留8ml繼續培養至80%左右再傳代,瓶蓋可稍微擰松。備注:細胞貼壁慢,傳代后細胞放2天不動(dòng)。
5.細胞瓶?jì)鹊呐囵B基含血清和雙抗,可收集后4℃保存備用,可補加2%血清。剛開(kāi)始傳代時(shí)建議一半用細胞瓶?jì)鹊呐囵B基,一半用客戶(hù)自備的培養基,使細胞逐漸適應培養條件,以免因不適應而造成生長(cháng)狀態(tài)不佳。
6.因為人組織細胞淋巴瘤細胞培養過(guò)程外因太多,所以我們的售后保障期為一周,超過(guò)一周的細胞我們會(huì )酌情處理,但不提供免費更換服務(wù)。ZYC3695 小鼠海馬趾神經(jīng)元 MN-h 形態(tài):貼壁,懸浮均有;上皮細胞樣 培養條件:MEM/F12 +10% FBS
上一產(chǎn)品:KGN人卵巢顆粒細胞癌
下一產(chǎn)品:SV-HUC-1人膀胱上皮永生化細胞
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