人組織細胞淋巴瘤細胞

人組織細胞淋巴瘤細胞培養步驟

一．培養基及培養凍存條件準備：

1） 準備基礎培養基( GIBCO，，添加NaHCO3 1.5g/L，丙酮酸鈉 0.11g/L)；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2） 培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過(guò)夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過(guò)夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2） U937人組織細胞淋巴瘤細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細胞凍存。貼壁細胞凍存時(shí)，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

人組織細胞淋巴瘤細胞注意事項：

1.收到細胞后首先觀(guān)察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發(fā)生請及時(shí)和我們聯(lián)系。

2.先不開(kāi)瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養箱靜置數小時(shí)（4h左右），穩定細胞狀態(tài)，切忌在溫箱內靜置過(guò)夜。

3.靜置后鏡檢，拍照，記錄細胞狀態(tài)。建議傳代后也拍照記錄細胞生長(cháng)情況。

4.  懸浮細胞：將細胞瓶?jì)纫后w都轉移至無(wú)菌離心管內，1000 轉/分鐘離心5min，培養基上清可備用，管底細胞沉淀用培養基重懸。鏡檢時(shí)若細胞密度超過(guò)80%，可將細胞懸液分至2個(gè)細胞瓶?jì)扰囵B；若密度未超過(guò)80%，細胞懸液移至原瓶繼續培養，待達到80%時(shí)再正常傳代。備注：聚團生長(cháng)慢，有密度依賴(lài)，必須使用T25培養瓶豎立培養，3天一次半量換液一次，1-2周傳代一次。

貼壁細胞：若細胞密度超過(guò)80%，可正常傳代；若未超過(guò)80%，收集細胞瓶?jì)鹊呐囵B基，留8ml繼續培養至80%左右再傳代，瓶蓋可稍微擰松。備注：細胞貼壁慢，傳代后細胞放2天不動(dòng)。

5.細胞瓶?jì)鹊呐囵B基含血清和雙抗，可收集后4℃保存備用，可補加2%血清。剛開(kāi)始傳代時(shí)建議一半用細胞瓶?jì)鹊呐囵B基，一半用客戶(hù)自備的培養基，使細胞逐漸適應培養條件，以免因不適應而造成生長(cháng)狀態(tài)不佳。

6.因為人組織細胞淋巴瘤細胞培養過(guò)程外因太多，所以我們的售后保障期為一周，超過(guò)一周的細胞我們會(huì )酌情處理，但不提供免費更換服務(wù)。ZYC3695    小鼠海馬趾神經(jīng)元    MN-h    形態(tài)：貼壁，懸浮均有；上皮細胞樣    培養條件：MEM/F12 +10% FBS