人腦星形膠質(zhì)母細胞瘤細胞

　Q1. 人腦星形膠質(zhì)母細胞瘤細胞液體培養基的保存是冷藏好？還是冷凍好？

　　要冷藏??！因為液體培養基經(jīng)冷凍后再經(jīng)溶化時(shí)，其溶液的pH值會(huì )發(fā)生改變，溶液往往變堿，某些成分溶解也會(huì )受到影響對細胞生長(cháng)不利。故液體培養基一定要存放在冷藏箱中，通常液體培養基在冷藏條件下可存放6個(gè)月 ~ 一年。

　　Q2.人腦星形膠質(zhì)母細胞瘤細胞 液體培養基中谷氨酰胺的作用，及使用方法。

　　幾乎所有的細胞對谷氨酰胺有較高的要求，細胞需要谷氨酰胺合成蛋白質(zhì)，在缺少谷氨酰胺時(shí)，細胞生長(cháng)不良而死亡。所以，各種培養液中都含有較大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不穩定，應置-20 ?C冰凍保存，用前加入培養基中。加有谷氨酰胺的液體培養基4 ?C 冰箱儲存兩周以上時(shí)，應重新加入原來(lái)量的谷氨酰胺?；A醫學(xué)細胞中心在其服務(wù)項目中配制分裝了高濃度（100倍）的谷氨酰胺溶液（1ml/支）。每支1ml的谷氨酰胺加到99ml*培養基中，其終濃度為2mM/ml培養基。包裝為粉紅色，-24?C保存。

　　Q3.細胞計數及存活測試
1、原理：
(1)計算細胞數目可用血球計數盤(pán)或是Coultercounter粒子計數器自動(dòng)計數。
(2)血球計數盤(pán)一般有二個(gè)chambers，每個(gè)chamber中細刻9個(gè)1mm2大正方形，其中4個(gè)角落之正方形再細刻16個(gè)小格，深度均為0.1mm。當chamber上方蓋上蓋玻片后，每個(gè)大正方形之體積為1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使用時(shí)，計數每個(gè)大正方形內之細胞數目，乘以稀釋倍數，再乘以104，即為每ml中之細胞數目。
(3)存活測試之步驟為dyeexclusion，利用染料會(huì )滲入死細胞中而呈色，而活細胞因細胞膜完整，染料無(wú)法滲入而不會(huì )呈色。一般使用藍色之trypan blue染料，如果細胞不易吸收trypan blue，則用紅色之Erythrosin bluish。計算細胞活率：活細胞數/(活細胞數+死細胞數)×100%。計數應在臺盼蘭染色后數分鐘內完成，隨時(shí)間延長(cháng)，部分活細胞也開(kāi)始攝取染料;因為臺盼蘭對蛋白質(zhì)有很強的親和力，用不含血清的稀釋液，可以使染色計數更為準確。