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人胰腺癌細胞

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人胰腺癌細胞運輸和保存:

人胰腺癌細胞;MIA PaCa-2說(shuō)明書(shū)視天氣狀況和運輸距離遠近,公司與客戶(hù)協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。

1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿(mǎn)干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運輸;收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進(jìn)行培養,如無(wú)法立刻進(jìn)行復蘇操作,凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。

2)T-25培養瓶充滿(mǎn)*培養基后進(jìn)行常溫運輸;收到細胞后請鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)狀態(tài),如鋪瓶率超過(guò)85%請立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細胞較多,請將培養瓶至于培養箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。

可以重發(fā)的情況有哪些?

(1)人胰腺癌細胞;MIA PaCa-2說(shuō)明書(shū)細胞運輸途中遭遇的各種問(wèn)題,細胞丟失、破損、漏液等,重發(fā);

(2)凍存的細胞復蘇后,絕大多數細胞未存活,重發(fā);

(3)存活的細胞靜置24小時(shí)后,絕大多數細胞未存活,重發(fā);

(4)凍存的細胞復蘇后或存活的細胞靜置4小時(shí)后并且未開(kāi)封,出現污染,重發(fā);

(5)視具體情況而定。

出現問(wèn)題,不予以重發(fā)的情況有哪些?

(1)人胰腺癌細胞;MIA PaCa-2說(shuō)明書(shū)客戶(hù)造成細胞污染,不重發(fā);

(2)客戶(hù)不正確操作致細胞狀態(tài)不好,不重發(fā);

(3)細胞狀態(tài)不好,未細胞培養前3天照片的,不重發(fā);

(4)細胞培養時(shí)經(jīng)其它處理的,不重發(fā);

(5)細胞收到2天內,未告知,不重發(fā);


人胰腺癌細胞細胞特性:

1)】人胰腺癌細胞;MIA PaCa-2說(shuō)明書(shū)組織來(lái)源于實(shí)驗動(dòng)物的正常眼組織。

2)細胞鑒定:細胞角蛋白-18(CK-18)免疫熒光染色為陽(yáng)性。

3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。

5)細胞生長(cháng)方式:上皮樣,不規則細胞,貼壁培養。

注意事項:

(1)凍存前細胞狀態(tài),細胞在對數生長(cháng)期,細胞密度適合,剛剛發(fā)生細胞融合,過(guò)密或連成片的細胞狀態(tài)不好,而且消化時(shí)不容易分散;

(2)凍存的密度不宜過(guò)低,10的6次方-7次方的數量級比較好,我凍存的細胞一般T25培養瓶(5*107),一瓶?jì)鲆还埽?.5ml凍存管),10cm培養皿(大概10的8次方個(gè)細胞)分成兩管。

(3)消化和吹打,切忌胰酶消化過(guò)度,吹打不可太用力,不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養基吹打哦,不是加入凍存液再吹打。

(4)離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對于腫瘤細胞株而言要求不是很?chē)栏?,我?0%-90%都用過(guò),問(wèn)題不大,個(gè)人認為10%-20%可以了,能節約處就節約點(diǎn)嘛!另外,凍存液可以在處理細胞前配置,放在4度冰箱預冷。細胞離心后直接用預冷的凍存液重懸,移入凍存管。

(5)關(guān)于“慢凍”,傳統的方法,LLC細胞凍存管用棉花包好,4度2h,-20度2h或更長(cháng),-80度過(guò)夜,后液氮。對于條件較好的實(shí)驗室和細胞凍存數量多的實(shí)驗室,推薦使用程序降溫盒,內裝異丙醇,在-80度并內可以逐漸降溫,很方便,省了包棉花、4度、-20度了。

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