人胰腺癌細胞

人胰腺癌細胞運輸和保存：

人胰腺癌細胞；MIA PaCa-2說(shuō)明書(shū)視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶(hù)協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。

1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿(mǎn)干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進(jìn)行培養，如無(wú)法立刻進(jìn)行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。

2)T-25培養瓶充滿(mǎn)*培養基后進(jìn)行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過(guò)85%請立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養瓶至于培養箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。

可以重發(fā)的情況有哪些？

（1）人胰腺癌細胞；MIA PaCa-2說(shuō)明書(shū)細胞運輸途中遭遇的各種問(wèn)題，細胞丟失、破損、漏液等，重發(fā)；

（2）凍存的細胞復蘇后，絕大多數細胞未存活，重發(fā)；

（3）存活的細胞靜置24小時(shí)后，絕大多數細胞未存活，重發(fā)；

（4）凍存的細胞復蘇后或存活的細胞靜置4小時(shí)后并且未開(kāi)封，出現污染，重發(fā)；

（5）視具體情況而定。

出現問(wèn)題，不予以重發(fā)的情況有哪些？

（1）人胰腺癌細胞；MIA PaCa-2說(shuō)明書(shū)客戶(hù)造成細胞污染，不重發(fā)；

（2）客戶(hù)不正確操作致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

（3）細胞狀態(tài)不好，未細胞培養前3天照片的，不重發(fā)；

（4）細胞培養時(shí)經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；

（5）細胞收到2天內，未告知，不重發(fā)；

人胰腺癌細胞細胞特性：

1)】人胰腺癌細胞；MIA PaCa-2說(shuō)明書(shū)組織來(lái)源于實(shí)驗動(dòng)物的正常眼組織。

2)細胞鑒定：細胞角蛋白-18(CK-18)免疫熒光染色為陽(yáng)性。

3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。

5)細胞生長(cháng)方式：上皮樣，不規則細胞，貼壁培養。

注意事項：

（1）凍存前細胞狀態(tài)，細胞在對數生長(cháng)期，細胞密度適合，剛剛發(fā)生細胞融合，過(guò)密或連成片的細胞狀態(tài)不好，而且消化時(shí)不容易分散；

（2）凍存的密度不宜過(guò)低，10的6次方-7次方的數量級比較好，我凍存的細胞一般T25培養瓶（5*107），一瓶?jì)鲆还埽?.5ml凍存管），10cm培養皿（大概10的8次方個(gè)細胞）分成兩管。

（3）消化和吹打，切忌胰酶消化過(guò)度，吹打不可太用力，不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養基吹打哦，不是加入凍存液再吹打。

（4）離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對于腫瘤細胞株而言要求不是很?chē)栏?，我?0%-90%都用過(guò)，問(wèn)題不大，個(gè)人認為10%-20%可以了，能節約處就節約點(diǎn)嘛！另外，凍存液可以在處理細胞前配置，放在4度冰箱預冷。細胞離心后直接用預冷的凍存液重懸，移入凍存管。

（5）關(guān)于“慢凍”，傳統的方法，LLC細胞凍存管用棉花包好，4度2h，-20度2h或更長(cháng)，-80度過(guò)夜，后液氮。對于條件較好的實(shí)驗室和細胞凍存數量多的實(shí)驗室，推薦使用程序降溫盒，內裝異丙醇，在-80度并內可以逐漸降溫，很方便，省了包棉花、4度、-20度了。