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人乳腺癌細胞

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人乳腺癌細胞常規說(shuō)明

 

凍存液成分:10%DMSO+40%FBS+50%基礎培養液

細胞質(zhì)檢情況:不含細菌、真菌、支原體等微生物污染

傳代建議:1:2~1:3傳代,2~3天換液1次

特別提醒:簽收細胞后,如細胞狀態(tài)不佳,或培養中遇到問(wèn)題,煩請當天盡快聯(lián)系,以便處理。當天及時(shí)反饋細胞情況和細胞照片是售后跟蹤處理重要的參考依據,請務(wù)必重視。

一、 人乳腺癌細胞復蘇

1. 把凍存管從液氮中取出來(lái),立即投入37℃水浴鍋中,輕微搖動(dòng)。液體都融化后(大概1-1.5分鐘),拿出來(lái)噴點(diǎn)酒精放到超凈工作臺里。

2. 把上述細胞懸液吸到裝10ml培養基的15ml的離心管中(用培養基把凍存管洗一遍,把粘在壁上的細胞都洗下來(lái)),1000轉離心5分鐘。

3. 把上清液倒掉,加1ml培養基把細胞懸浮起來(lái)。吸到裝有10ml培養基的10cm培養皿中前后左右輕輕搖動(dòng),使培養皿中的細胞均勻分布。

4. 標好細胞種類(lèi)和日期、培養人名字等,放到CO2培養箱中培養,細胞貼壁后換培養基。

5. 3天換一次培養基。

二、 MCF7 [MCF-7];人乳腺癌細胞傳代

1. 培養皿中的細胞覆蓋率達到80%-90%時(shí)要傳代。

2. 把原有培養基吸掉。

3. 加適當的胰蛋白酶(能覆蓋細胞就行),消化1-2分鐘。

4. 細胞都變圓后加如入等體積的含血清的培養基終止消化。

5. 用移液槍吹打細胞,把細胞都懸浮起來(lái)。

6. 把細胞吸到15ml的離心管中,1000轉離心5分鐘。

7. 倒掉上清液,加1-2ml培養基,把細胞都吹起來(lái)。

8. 根據細胞種類(lèi)把細胞傳到幾個(gè)培養皿中。一般,癌細胞分5個(gè),正常細胞傳3個(gè)。繼續培養。

三、人乳腺癌細胞 凍存

把細胞消化下來(lái)并離心(同上)。用配好的凍存液把細胞懸浮起來(lái),分裝到滅菌的凍存管中,靜止幾分鐘,寫(xiě)明細胞種類(lèi),凍存日期。4℃ 30min,-20℃ 30min,-80℃過(guò)夜,然后放到液氮灌中保存。

凍存液的配制: 70%的*培養基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加,邊滴邊搖。

要注意的就是無(wú)菌操作!

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