小鼠骨肉瘤成骨細胞

　小鼠骨肉瘤成骨細胞

一、客戶(hù)收到細胞先不開(kāi)蓋，放在培養箱靜置若干小時(shí)后（看細胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況，并對細胞進(jìn)行不同倍數拍照（建議受收細胞時(shí)的培養基拍一張照片，觀(guān)察培養基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞100X，200X各一張），排除細胞本身污染的情況；
　　收到細胞未開(kāi)封，出現污染狀況我們負責免費發(fā)送一株細胞。
　　二、如為貼壁細胞，請在顯微鏡下觀(guān)察細胞密度：
　　1.  未超過(guò)80%匯合度時(shí)，用75%酒精（建議配置75%酒精的水也是滅菌超純水，噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺內，嚴格無(wú)菌操作；然后打開(kāi)蓋子，先用槍頭把培養基吸出10ml左右，放在離心管里，然后瓶口過(guò)火（嚴禁直接傾倒），這樣可以保證不污染，再用10ml的移液管，將剩余的培液全部吸出，放于離心管中，培養瓶中只剩余10ml左右培液就可以了。培養16hr(時(shí)間根據細胞生長(cháng)情況調整）之后，傳代或者凍存。
　　2. 超過(guò)80%匯合度時(shí)，請按細胞培養條件傳代培養。具體步驟如下：
　　1) 棄去培養液，用3ml PBS（不含鈣，鎂離子）洗1-2次；
　　2) 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM  EDTA）于T25培養瓶中，倒轉放于37度培養箱1-3分鐘預熱，然后又將培養瓶倒轉大約30秒后，在倒置顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓分散，輕敲幾下培養培養瓶，細胞隨即脫落下來(lái)；
　　3) 加入6-8ml*培養基，吸出，分到新的培養瓶中，按要求分瓶。
　　三、如為懸浮細胞，吸出培養液，1000轉/分鐘離心5分鐘，吸出上清，管底細胞用新鮮培養基懸浮細胞后移回培養瓶。
　　注意：換液時(shí)一半用我們的培養基，一半用你們的，以免細胞不適應而造成生長(cháng)不好。
　　四、細胞出現問(wèn)題，可重發(fā)的情況有哪些？判定標準是什么？
　?。?）細胞運輸途中遭遇的各種問(wèn)題，細胞丟失、破損、漏液等，重發(fā)；
　?。?）凍存的細胞復蘇后，絕大多數細胞未存活，重發(fā)；
　?。?）存活的細胞靜置24小時(shí)后，絕大多數細胞未存活，重發(fā)；
　?。?）凍存的細胞復蘇后或存活的細胞靜置4小時(shí)后并且未開(kāi)封，出現污染，重發(fā)；
　?。?）視具體情況而定。
　　五、細胞出現問(wèn)題，不予以重發(fā)的情況有哪些？
　?。?）客戶(hù)造成細胞污染，不重發(fā)；
　?。?）客戶(hù)不正確操作致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；
　?。?）細胞狀態(tài)不好，未提供細胞培養前3天照片的，不重發(fā)；
　?。?）細胞培養時(shí)經(jīng)其它處理的，不重發(fā)；
　?。?）細胞收到2天內，未告知，不重發(fā)；
　?。?）視具體情況而定。　

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