小鼠心肌細胞

1、培養液：1：1 混合的DMEM / F12 培養液，添加終濃度為10%小牛血清（FCS）、100IU/ml 青霉素、100μg/ml 鏈霉素。

2、消化液：胰酶（效價(jià)為1：250） 0.08%、膠原酶II（活力為150U/mg） 0.05% ，用pH 7.2-7.8 的D-Hanks溶液配制，-20 ℃保存。

3、D-Hanks溶液（pH 7.2-7.8）：KCl 0.4 g 、KH2PO4 0.06 g 、NaCl 8.00g 、NaHCO3 0.35 g 、Na 2HPO4•7H2O 0.09 g 、酚紅 0.01 g 1L。

小鼠心肌細胞取生后1-4d的乳鼠，用75%乙醇消毒皮膚，再用大頭針固定乳鼠的頭及四肢，剪開(kāi)胸部皮膚，用75%乙醇消毒皮下組織，更換鑷子及剪刀，開(kāi)胸取出心臟，將心臟放入盛有D-Hanks溶液的平皿（或青霉素瓶）中，剪去心房，剪開(kāi)心室，用D-Hanks溶液沖洗三次，去除殘留積血后，將心臟剪成1mm3 大小的碎片，再將心臟碎片轉移至離心管中，加5ml左右消化液，37℃消化5 min，自然沉淀，棄上清，再加5ml左右消化液，37℃消化20min（每隔2min振搖幾下），用吸管吹打1min 后，將未消化*的心臟碎片吸出至另一離心管中，加入2ml冷的培養液終止消化，1000 rpm 5min ，棄上清，沉淀中加入D-Hanks溶液2ml， 1500 rpm 10min ，棄上清，沉淀中加入培養液2ml，用吸管吹打制成細胞懸液。上述未消化*的心臟碎片補加5ml左右消化液后繼續消化，同樣操作，合并細胞懸液后放入培養瓶中m二氧化碳培養箱中（37℃ 5%CO2）培養。小鼠心肌細胞