羊骨髓間充質(zhì)干細胞

對羊骨髓間充質(zhì)干細胞加以誘導分化,并分析其作為組織工程瓣膜種子細胞的可行性,探討體外培養羊骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs)和一般細胞生物學(xué)的特性。方法:采用成年山羊10只,麻醉后分別于股骨大轉子穿刺抽取羊骨髓標本10ml,采用比重為1.07g/ml的淋巴分離液,接種于無(wú)菌的培養瓶中,利用多孔培養板,取第二、三代骨髓間充質(zhì)干細胞,加入LG-DMEM條件培養基進(jìn)行體外定向誘導分化。對誘導后培養的骨髓基質(zhì)的間充質(zhì)干細胞(MSCs)進(jìn)行細胞生長(cháng)測定及形態(tài)觀(guān)察。結果:培養后的骨髓間充質(zhì)干細胞和血管間質(zhì)細胞形態(tài)相似,呈梭形或多角型,均24小時(shí)內貼壁,3～4天鋪滿(mǎn)瓶底。誘導分化后的骨髓間充質(zhì)干細胞與血管間質(zhì)細胞上清液羥脯氨酸含量基本相似,且生長(cháng)曲線(xiàn)也相同。培養的MSCs粘附貼壁呈紡錘狀,并有多個(gè)突起,潛伏期一般為24小時(shí),接種后第8天MSCs生長(cháng)逐漸緩慢,進(jìn)入平臺期。結論:誘導分化后所培養的間充質(zhì)干細胞,具有*的增殖和表型特征,是合適的組織工程瓣膜間質(zhì)種子細胞。

用75%酒精噴灑整個(gè)培養瓶消毒，將其平躺置于培養箱中進(jìn)行1-3小時(shí)的緩沖，.然后置于無(wú)菌操作臺，打開(kāi)瓶口，將其中的培養液去掉，再往其中加入5-6mL新鮮培養基(以T25培養瓶為例)并置于細胞培養箱中培養，根據細胞生長(cháng)狀況及培養基顏色變化對其進(jìn)行換液以及傳代，一般2到3天換一次液；