大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞（高分化）

1.大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(高分化)PC-12(高分化)細胞液體培養基的保存是冷藏好？還是冷凍好？

　　要冷藏??！因為液體培養基經(jīng)冷凍后再經(jīng)溶化時(shí)，其溶液的pH值會(huì )發(fā)生改變，溶液往往變堿，某些成分溶解也會(huì )受到影響對細胞生長(cháng)不利。故液體培養基一定要存放在冷藏箱中，通常液體培養基在冷藏條件下可存放6個(gè)月 ~ 一年。

　　2.PC-12(高分化)細胞 液體培養基中谷氨酰胺的作用，及使用方法。

　　幾乎所有的細胞對谷氨酰胺有較高的要求，細胞需要谷氨酰胺合成蛋白質(zhì)，在缺少谷氨酰胺時(shí)，細胞生長(cháng)不良而死亡。所以，各種培養液中都含有較大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不穩定，應置-20 ?C冰凍保存，用前加入培養基中。加有谷氨酰胺的液體培養基4 ?C 冰箱儲存兩周以上時(shí)，應重新加入原來(lái)量的谷氨酰胺?；A醫學(xué)細胞中心在其服務(wù)項目中配制分裝了高濃度（100倍）的谷氨酰胺溶液（1ml/支）。每支1ml的谷氨酰胺加到99ml*培養基中，其終濃度為2mM/ml培養基。包裝為粉紅色，-24?C保存。

　　3. PC-12(高分化)細胞 培養用液pH對細胞生長(cháng)的影響

　　由于，大多數細胞適宜pH為7.2~7.4，偏離此范圍對細胞將產(chǎn)生有害的影響。各種細胞對pH的要求也不*相同，原代培養細胞一般對pH變動(dòng)耐受差，無(wú)限細胞系耐受力強。

　　但總體來(lái)說(shuō)，細胞耐酸性比耐堿性強一些，偏酸環(huán)境中更利于細胞生長(cháng)。因此，我們在配制培養用液時(shí)，可把液體的pH稍微調得偏酸一些。液體在經(jīng)過(guò)0.10um或0.22um濾膜過(guò)濾時(shí)，溶液的pH還會(huì )向上浮動(dòng)0.2左右。

　　4.大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(高分化)PC-12(高分化)細胞 細胞傳代消化時(shí)所用胰酶濃度越高越好嗎？

　　不見(jiàn)得！因為胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、溫度、胰酶濃度及溶液中是否含有Ca++, Mg++離子和血清等因素有關(guān)。通常情況下，pH 8.0 , 溫度 37 oC 其作用能力zui強。另外，鈣、鎂離子及血清均能大大降低其消化能力。我們每次進(jìn)行傳代消化前，一定要用D-Hanks液或PBS液反復沖洗細胞培養瓶，以便于將含血清的培養基沖洗干凈，這樣就能大大提高消化液的消化能力。本中心通常使用的消化液濃度為：

　?。?）０.０５％胰蛋白酶＋０.０２％ＥＤＴＡ；

　?。?）０.２５％胰蛋白酶＋０.０３％ＥＤＴＡ。

　?。?）0.25% 胰蛋白酶

　　溶液ｐＨ８.０～９.０；使用Ｄ－Ｈａｎｋ液配制。

　　多數細胞傳代消化可使用０.０５％胰蛋白酶＋０.０２％ＥＤＴＡ這種消化液。