服務(wù)熱線(xiàn)
020-86438890
品牌 | 其他品牌 | 貨號 | CB017 |
---|---|---|---|
規格 | 株 | 供貨周期 | 一周 |
主要用途 | 科研 | 應用領(lǐng)域 | 醫療衛生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農業(yè) |
人結腸癌細胞細胞接收后的處理:
1) 收到細胞后,請檢查發(fā)貨培養瓶的狀況,若發(fā)現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2) 在顯微鏡下確認細胞生長(cháng)狀態(tài)時(shí),盡量在低倍鏡(4或5X物鏡)下進(jìn)行,能準確判斷細胞的傳代密度??醇毎男螒B(tài)請在10X和20×物鏡下,同時(shí)給剛收到的細胞拍照,(10×,20×)各2-3張以及培養瓶外觀(guān)照片一張留存,作為細胞需要售后時(shí)提供收到細胞時(shí)細胞狀態(tài)的依據。
3) 觀(guān)察好細胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h。
4) 貼壁細胞:在運輸過(guò)程中貼壁細胞會(huì )有脫落的現象,如發(fā)現貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長(cháng),可將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到加有按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的*培養基的原培養瓶中(或新的培養瓶中)。
5) 懸浮細胞:T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養基和細胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到新的培養瓶中(加入按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的*培養基)。
6)備注:運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來(lái)培養細胞,請換用按照說(shuō)明書(shū)細胞培養條件新配制的*培養基來(lái)培養細胞。 收到細胞后第1次傳代建議1:2傳代 。
人結腸癌細胞細胞培養步驟
一.培養基及培養凍存條件準備:
1) 準備McCOY's 5A(推薦iCell-0011) 培養基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗1%。
2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過(guò)夜(或將細胞懸液加入250px皿中,加入約8ml培養基,培養過(guò)夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4 . 收到細胞后*傳代推薦將細胞懸液按1:2的比例分到新的含6ml培養基的新皿中或者瓶中,建議客戶(hù)凍存一支備用,后續傳代根據實(shí)際情況按1:2到1:5的比例進(jìn)行。
細胞凍存:待細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細胞凍存。
下面T25瓶為例;
1.細胞凍存時(shí),棄去培養基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,細胞變圓脫落后,加入2ml*培養基終止消化,可使用血球計數板計數。
2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個(gè)凍存管細胞數目大于1X106個(gè)細胞凍存。
3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
上一產(chǎn)品:人永生化角質(zhì)形成細胞
下一產(chǎn)品:HEK293人胚腎細胞
掃一掃 微信咨詢(xún)
© 2024 廣州市超博科技有限公司 版權所有 備案號:粵ICP備19162636號
技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng) 管理登陸 GoogleSitemap