服務(wù)熱線(xiàn)
020-86438890
品牌 | 其他品牌 | 貨號 | CB015 |
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規格 | 株 | 供貨周期 | 一周 |
主要用途 | 科研 | 應用領(lǐng)域 | 醫療衛生,環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農業(yè) |
人大細胞肺癌細胞 細胞培養步驟
一.培養基及培養凍存條件準備:
1) 準備RPMI-1640培養基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。
二. 細胞處理:
1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過(guò)夜(或將細胞懸液加入250px皿中,加入約8ml培養基,培養過(guò)夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
注:第1次傳代推薦傳代比例為1:2,以后傳代比例可根據客戶(hù)需要自己決定。
3)細胞凍存:待細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細胞凍存。
下面T25瓶為類(lèi);
1,細胞凍存時(shí),棄去培養基后,PBS清洗一遍后加入1ml胰酶,細胞變圓脫落后,加入1ml含血清的培養基終止消化,可使用血球計數板計數。
2,4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞,根據細胞數量加入血清和DMSO,輕輕混勻,DMSO終濃度為10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存1ml細胞懸液,注意凍存管做好標識。
3,將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
人大細胞肺癌細胞 注意事項:
1.收到細胞后,若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。
2.收到細胞先不開(kāi)瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養箱靜置2-4小時(shí)(視細胞密度而定)穩定細胞狀態(tài)。接著(zhù)在倒置顯微鏡下觀(guān)察細胞生長(cháng)情況,并對細胞進(jìn)行不同倍數拍照(建議收細胞時(shí)就整體外觀(guān)拍一張照片,觀(guān)察培養基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態(tài),100*,200*各一張),觀(guān)察記錄細胞在運輸過(guò)程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷(xiāo)售依據。
3.由于細胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸等多方面因素影響,故本公司只保證客戶(hù)收到細胞后一周內的細胞狀態(tài),故客戶(hù)需要售后時(shí)需出示收到細胞的時(shí)間證明及客戶(hù)提供收貨時(shí)間和發(fā)現問(wèn)題后客服人員溝通的時(shí)間證明,期間間隔時(shí)間不能大于7天。
4.所有動(dòng)物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過(guò)此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
上一產(chǎn)品:H1650人非小細胞肺癌細胞
下一產(chǎn)品:人永生化角質(zhì)形成細胞
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