Hyclonesv30087.02北美特級血清*

Hyclonesv30087.02北美特級血清*?

適合用于常規細胞原代細胞以及干細胞的培養
內毒素含量極低 <3EU/ml(規定：特級胎牛血清<10 EU/ml)
極利于細胞的生長(cháng)和傳代 ，適合各種細胞培養
七次無(wú)菌過(guò)濾，zui后三次為0.1 µm無(wú)菌過(guò)濾處理
進(jìn)行細菌、真菌、支原體、病毒及病毒抗體檢測，符合動(dòng)物協(xié)會(huì )要求

Hyclonesv30087.02北美特級血清*?

血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血動(dòng)物的性別、年齡、生理條件和營(yíng)養條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(cháng)因子、激素、無(wú)機物等，這些物質(zhì)對促進(jìn)細胞生長(cháng)或抑制生長(cháng)活性是達到生理平衡的

胎牛血清FBS保存方法
1、需要長(cháng)期保存的PAN牛血清必須儲存于-20℃ - 70℃ 低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時(shí)間切勿超過(guò)1個(gè)月。切勿將血清在 37℃放置太久,否則血清會(huì )變得渾濁,同時(shí)血 清中的有效成分會(huì )被破壞，而影響血清質(zhì)量。如果一次無(wú)法用完一瓶,可 將40～45ml分裝于無(wú)菌50ml離心管中。由于血清結冰時(shí)體積會(huì )增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前，必須預留 一 定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶?jì)隽选?/p>

2、一般廠(chǎng)商提供的血清為無(wú)菌,無(wú)需再過(guò)濾除菌。如發(fā)現血清有懸浮物,則可將血清加入培養液內一起過(guò)濾,切勿直接 過(guò)濾血清。

3、瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃ 至 -70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫,待全 部溶解后再分裝,一般以50ml無(wú)菌離心管可分裝40～45ml。在溶解過(guò)程 中須規則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度 與成分均一,減少沈淀的發(fā)生。.切勿直接將血清從-20℃進(jìn)入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而 出現沉淀。

4、熱滅活是指56℃, 30分鐘加熱已*解凍的血清.加熱過(guò)程中須規則搖晃均勻.此熱處理的目的是使血清中的補體 成分滅活.除非必須,一般不建議作此熱處理,因為熱處理會(huì )造成血清沉 淀物顯著(zhù)增多,而且還會(huì )影響血清的質(zhì)量.補體 參與反應有:細胞毒作用, 平滑肌細胞收縮, 肥大細胞和血小板釋放組胺, 增強吞噬作用, 促進(jìn)淋巴細胞和巨噬細胞 發(fā)生化學(xué)趨化和活化。

5、血清中的沉淀物 絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會(huì )影響血清本身 的質(zhì)量.可用離心3000rpm,5分鐘去除,也可不用處理。 顯微鏡下 "小黑點(diǎn)":經(jīng)過(guò)熱處理過(guò)的血清,沉淀物 的形成會(huì )顯著(zhù)增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀(guān)察象"小黑點(diǎn)",常誤認為血清受污染。一般情況下,此小黑 點(diǎn)不會(huì )影響細胞生 長(cháng),但如果懷疑血清質(zhì)量,則應立即停止使用,更換另一批號的血清。

胎牛血清使用中遇到的常見(jiàn)問(wèn)題總結
 

一、血清滅活問(wèn)題。

1、問(wèn)：加到培養基中的血清必須滅活嗎？

答：不是必須的，看做什么實(shí)驗了。

2、問(wèn)：胎牛血清滅活是56℃ 30分鐘嗎？

答：如果用于培養大多數的腫瘤細胞，血清一般是不需要滅活的，這樣可以有效保存血清中的生長(cháng)因子。 但是如果用于培養一些表面具有補體受體的細胞，如內皮細胞，血清是 需要滅活，一般是56℃，30min。

3、問(wèn)：我要做滋養細胞培養，胎牛血清要滅活嗎？

答：進(jìn)口的一般都已滅活，國產(chǎn)的不一定，還是滅活一下再用較安全。

4、問(wèn)：我用病毒上清轉染細胞，培養用的血清需要滅活嗎？因為血清中可能有些補體和抗體，是不是會(huì )影 響轉染？我想未滅活的血清中含些抗體補體可能會(huì )和病毒相結合，影響 轉染，正確嗎？細胞是單核細胞白血病細胞， 病毒是病毒包裝細胞PT67收集的病毒上清。為什么要用無(wú)血清培養基加病毒孵育幾小時(shí)，目的是什么？

答：血清一定要滅活，可以先用無(wú)血清培養基加病毒孵育幾小時(shí)以后再加血清。避免雜蛋白對病毒和宿主 結合過(guò)程的干擾，一般是2-6小時(shí)，根據細胞的狀態(tài)決定。血清不一定需 要滅活，滅活的目的是將血清中的補體滅活 ！這要根據實(shí)際情況而定，如果沒(méi)有把握那就滅活吧，也不麻煩56度半個(gè)小時(shí)。

5、問(wèn)：(1)我買(mǎi)的是PAN南美胎牛血清，要滅活嗎？有些說(shuō)法是需要，有些說(shuō)直接解凍后就可以加入到培 養基中；我配制胰蛋白酶液，用的是D-PBS，有關(guān)系嗎？

答：關(guān)于血清的熱滅活，是很多人感興趣也存在一定爭議的話(huà)題。大多數實(shí)驗室將血清的熱滅活還是作為 常規來(lái)執行，因為有兩個(gè)作用，是滅活補體，第二是滅活血清中可 能存在的支原體。但是實(shí)驗者并沒(méi)有考慮熱處 理對血清中的生長(cháng)因子、氨基酸等成分帶來(lái)的負面影響。

我在實(shí)驗室處理血清的時(shí)候，有一次水浴箱在滅活過(guò)程中出現故障，溫度升高到80℃，血清變成了凝膠狀 ，我重新處理了另外一份血清，將兩份血清對比，發(fā)現高溫直接影響到 血清所含的抗體蛋白。在56℃下滅活半小時(shí)以 上，肯定也會(huì )對里面的蛋白起到破壞作用。下次有機會(huì )我做個(gè)延長(cháng)滅活時(shí)間的實(shí)驗試試，看看到底有多大的影響。熱 滅活之后，血清放在四 度冰箱久了，就會(huì )有沉淀產(chǎn)生，這常常會(huì )被認為是微生物污染或者是黑膠蟲(chóng)污染。為了驗證到 底有沒(méi)有污染，常常又會(huì )把血清放置37℃溫育，但是血清中的蛋白會(huì )進(jìn)一步析出，后還是 要做鏡檢，無(wú)菌培養試驗 ，和革蘭氏染色試驗，非常麻煩。