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看看這篇文章,學(xué)習下細胞培養板的操作步驟

更新時(shí)間:2023-01-15瀏覽:666次

  細胞培養板在進(jìn)行細胞操作時(shí)同樣遵循嚴格無(wú)菌的原則,各項操作要保證規范、科學(xué),不對細胞的生長(cháng)造成額外的影響。這其中最常見(jiàn)的問(wèn)題就是如何保證加樣后細胞的均勻和盡量減少換液對細胞生長(cháng)狀態(tài)的影響。
 
  細胞培養板的操作步驟:
 
  1、加樣品:將標本稀釋液100ul(或2滴)加到包被板內(預留陰陽(yáng)性及空白對照2-5孔),將待檢血清用PBS或生理鹽水按1:20稀釋后取10ul加入反應孔內。
 
  2、加對照:加入陰性對照1-3孔,陽(yáng)性對照1孔,各100ul對照血清??瞻讓φ?孔空置。
 
  3、溫育:將反應板震蕩使樣品混勻后,置37℃溫箱或水浴反應20分鐘。
 
  4、洗板:用蒸餾水將濃縮洗滌液15ml稀釋至300ml。(1)手洗:將反應板孔內容物傾出,將洗滌液注滿(mǎn)反應孔,放置30秒鐘后用力甩去,如此重復5次后拍干。(2)機洗:5次,每孔注入洗滌液200ul或注滿(mǎn),停留30秒鐘后吸盡拍干。
 
  5、加酶標工作液:每孔加入100ul(或2滴)酶標工作液,置37℃溫箱反應20分鐘后,洗板5次,洗板操作同步驟4。
 
  6、顯色和終止反應:將底物A、B液各50ul(或1滴)加到反應孔內,37℃避光顯色10分鐘。每孔加入終止液50ul(或1滴)混勻終止反應。

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