qPCR熒光定量技術(shù)不僅實(shí)現了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規PCR相比，qPCR熒光定量具有特異性更強、靈敏度高、重復性好、定量準確、速度快、全封閉反應、有效解決PCR污染問(wèn)題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，已成為*的核酸分子定量的標準方法，目前在基因表達研究和臨床疾病檢測等領(lǐng)域已得到廣泛應用（如轉基因動(dòng)植物檢測、RNAi基因失活率檢測、病原微生物或病毒含量檢測、基因差異表達、基因分型）。

　　qPCR熒光定量的分類(lèi)：

　　TaqMan熒光探針擴增時(shí)在加入一對引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個(gè)報告熒光基團和一個(gè)淬滅熒光基團。探針完整時(shí)，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時(shí)，Taq酶的5‘-3‘外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監測系統可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。

　　SYBRGreen熒光染料法是一種DNA結合染料，能非特異地摻入到雙鏈DNA中去。在游離狀態(tài)下，它不發(fā)出熒光，但一旦結合到雙鏈DNA中以后，便可以發(fā)出熒光。在qPCR熒光定量實(shí)驗中它的優(yōu)點(diǎn)就是可以與任意引物、模板相配合，用于任意反應體系中。從經(jīng)濟角度考慮，它也比其它的探針的qPCR熒光定量?jì)r(jià)格要便宜得多。但由于它能與所有的雙鏈DNA結合，所以一旦反應體系中出現非特異擴增，那它就會(huì )影響到定量結果的可靠性與重復性。要避免這種不利因素，可以通過(guò)選擇良好的引物并優(yōu)化反應條件以消除非特異性影響。