細胞凍存步驟： 

細胞復蘇步驟： 

常見(jiàn)注意事項： （廣州市超博科技有限公司）

有關(guān) DMSO 的一些注意事項：?? 

DMSO 能夠快速穿透細胞膜進(jìn)入細胞中，降低冰點(diǎn)、延緩凍存過(guò)程，同時(shí)提高細胞內的離子 濃度、減少細胞內冰晶的形成，從而減少細胞損傷程度。 

DMSO 在溶解過(guò)程中會(huì )放熱，應先與培養基混勻后再加血清，同時(shí)凍存液需要提前配置， DMSO 現配對細胞的毒性可能更大； 

復蘇時(shí)，要離心去除 DMSO，并用新鮮的培養基洗滌 1-2 次，注意離心的時(shí)候速度不要太快； 

2.  血清需要比正常養細胞時(shí)多加，一般為 10%-20%。 

3.  解凍時(shí)，要盡快將凍存管整體溫度上升至 37 攝氏度，由于凍存管具有一定的厚度，故 而可以將水浴鍋的溫度調至 40 攝氏度左右，可以縮短解凍時(shí)間。 

4.  梯度凍存，即可以按照-4℃-->20℃~40℃-->80℃-->液氮的順序程序性降溫。 

知識點(diǎn)思維擴散： 

  1972 年，冷凍損傷的兩因素假說(shuō)：冰晶損傷和溶液損傷假說(shuō)被 Mazur 等人首先提出，

他們是根據中國倉鼠組織培養細胞的低溫保存實(shí)驗數據分析得到的。 

 冰晶損傷假說(shuō)認為隨著(zhù)溫度的下降，細胞內外的水分結冰，所形成的冰晶會(huì )造成細胞膜

和細胞器的破壞并引起細胞死亡。這種因細胞內部結冰而致的細胞損傷即就是冰晶損傷

(Intracellular ice damage)。冰晶損傷是由冷卻速度過(guò)快造成，冷卻速度越快，冰晶損傷越大。 

 溶液損傷解說(shuō)認為隨著(zhù)溫度的下降，細胞外部的水分會(huì )先結冰，從而使得未結冰的溶液

中電解質(zhì)濃度升高，細胞膜上的脂質(zhì)會(huì )因長(cháng)時(shí)問(wèn)暴露在高溶質(zhì)的溶液中而受到損壞，細胞發(fā)

生滲漏，導致在復溫時(shí)大量水分滲入細胞內造成細胞死亡。這種因保存溶液溶質(zhì)濃度增高而

致的細胞損傷被稱(chēng)為溶液損傷(Solution damage)。溶液損傷是由冷卻速度過(guò)慢，使細胞在高

濃度的溶液中暴露的時(shí)間過(guò)長(cháng)而造成，冷卻速度越慢，此損傷越嚴重。 

  作者：老談